Что такое pcr сайта

Posted by

Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен



Диагностика инфекционных заболеваний – бактериальных и вирусных – направлена на раннее выявление возбудителей, что позволяет назначать раннюю и максимально эффективную терапию.

Оглавление:

Самым современным способом диагностики инфекций является ПЦР или полимеразная цепная реакция. Так что же это за метод, и для чего он нужен?

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.



Как сдать кровь на ПЦР

При подготовке к анализу следует придерживаться общих рекомендаций: не пить и не есть непосредственно перед анализом крови. Хотя для сдачи крови на ПЦР можно так строго не придерживаться этих требований, так как точность исследования не зависит от того, на сытый или голодный желудок был взят анализ.

Какие заболевания можно выявить с помощью ПЦР

С помощью ПЦР можно выявить практически любые вирусные и бактериальные заболевания. Для анализа используется не только кровь, но и другие биологические материалы: сперма, слюна, мазки из уретры и с шейки матки. Анализ крови будет информативен в том случае, если возбудитель конкретного заболевания проникает в кровь человека. Поэтому ПЦР крови назначают при следующих заболеваниях:

  • вирусные гепатиты А, В, С, D и TT;
  • цитомегаловирус;
  • герпетическая инфекция (вирусы герпеса 1, 2 и 4-го типов);
  • ВИЧ-инфекция
  • энтеровирусная инфекция;
  • опоясывающий лишай;
  • краснуха;
  • токсоплазмоз;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • листериоз.

Если же взять во внимание возможность проведения ПЦР других биоматериалов, то в список заболеваний, выявляемых с помощью ПЦР, следует добавить:

Особо актуально в настоящее время ПЦР анализа крови беременной на так называемые TORCH-инфекции: цитомегаловирус, токсоплазмоз, краснуху и герпесвирусную инфекцию. Связано это с тем, что упомянутые заболевания могут привести к аномалиям развития плода.

Преимущества ПЦР

  1. 100% точность диагностики – если в крови есть даже несколько фрагментов ДНК возбудителя, с помощью ПЦР они буду выявлены, и будет поставлен точный диагноз. Это главное отличие данного метода от других способов диагностики – ИФА, общего анализа крови и прочих.
  2. Специфичность. При проведении ПЦР отсутствует такое понятие, как ложноположительный или ложноотрицательный результат. В отличие от иммуноферментного анализа (ИФА).
  3. Возможность проведения анализа сразу на несколько возбудителей из одного образца биоматериала, что делает метод удобным для пациента – не нужно несколько раз сдавать анализ.
  4. Быстрота. Не нужно выделять и выращивать возбудителя на питательных средах, как это делается при бактериологическом исследовании. Результат может быть готов уже в день сдачи анализа.
  5. С помощью ПЦР выявляют возбудителей латентных заболеваний, когда возбудитель в организме есть, но он еще не вызвал заболевание, или когда пациент является носителем инфекции (гепатита или ВИЧ).
  6. Низкая стоимость. Цена анализа ПЦР на одного возбудителя составляетрублей. Чуть дороже стоит полуколичественный анализ на вирусы – около 1000 рублей.

Недостатки анализа

ПЦР является высокотехнологичным методом исследованием и предъявляет высокие требования к оснащению лаборатории. Помещение, где делают анализ, обязательно должно быть оснащено фильтром биологической очистки, так как в воздухе постоянно присутствуют частицы кожи, слюны, содержащие в своем составе молекулы ДНК. Несоблюдение техники работы с биоматериалами может стать причиной неверного результата.



Анализ крови – расшифровка у взрослых (ПЦР)

Трактовка результатов этого исследования не представляет сложностей, потому что отсутствует таблица норм анализа крови на ПЦР. В бланке результатов могут фигурировать лишь две фразы:

  • отрицательный результат – возбудитель, на который проводился анализ, не выявлен;
  • положительный результат – в организме имеется возбудитель указанного заболевания.

Следует знать, что ПЦР может быть положительной даже при отсутствии клинических симптомов заболевания! Расшифровка анализа крови на ПЦР у детей не отличается от таковой у взрослых.

Кому нужно сдать анализ на ПЦР

Любой человек может сдать кровь для исследования. Прямым показанием для исследования является подозрение на инфекции передающиеся половым путем (хламидиоз, гарднереллез, ВИЧ-инфекция). При случайном незащищенный половом контакте только ПЦР поможет поставить диагноз на ранней стадии, если человек заразился каким-либо заболеванием. В обязательном порядке кровь на TORCH-комплекс сдают беременные женщины. А также женщины, только планирующие беременность.

Хотя ПЦР является максимально эффективным методом диагностики, зацикливаться только на нем не стоит. Обследование пациента при любом заболеваний должно носить комплексный подход. Если цепная полимеразная реакция позволяет выявить возбудителя, то серологическое исследование позволяет оценить эффективность лечения, реакцию организма на возбудителя и лекарства. Назначать все исследования должен врач по показаниям.

Увидеть, как выполняется анализ крови ПЦР, вы сможете, просмотрев данный видео-обзор:



Гудков Роман, врач-реаниматолог

15,236 просмотров всего, 5 просмотров сегодня

Источник: http://okeydoc.ru/chto-takoe-analiz-krovi-na-pcr-i-zachem-on-nuzhen/

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР, используется в лабораторной диагностике большинства инфекционных заболеваний. Он позволяет обнаружить в исследуемом материале генетический материал микроорганизмов и таким образом идентифицировать их.

Что это такое

Метод был разработан в 1983 году, а в 1993 году его автор – Мюллис – получил Нобелевскую премию.



Основы метода

Каждый вид микроорганизмов, растений или животных имеет уникальный набор хромосом. Они образованы ДНК – дезоксирибонуклеиновой кислотой. Мелкие фрагменты ДНК называются нуклеотидами, а их определенная последовательность составляет ген. Каждый ген кодирует синтез одного белка, например, коллагена, альбумина и всех остальных. Последовательность нуклеотидов уникальна. Для каждого вида живых организмов существуют общие участки ДНК, отвечающие за однообразие в пределах этого вида.

Анализ ДНК нескольких сотен микробов, попавших в материал для исследования, не позволит выявить видовые закономерности. Необходимо во много раз увеличить количество значимых генетических компонентов, что даст возможность их идентифицировать. Эту задачу и решает метод ПЦР.

Исследование относится к области молекулярной биологии. К ДНК микроба добавляются ДНК-полимераза и свободные нуклеотиды. Полимераза – фермент, обеспечивающий многочисленное копирование нужного участка из имеющихся нуклеотидов. Запускают процесс праймеры – короткие нити рибонуклеиновой кислоты (РНК), прикрепляющиеся к началу нужного гена.

Процесс анализа состоит из нескольких фаз, каждая из которых требует определенного времени и температурного режима. В течение нескольких часов из тысячной доли грамма ДНК бактерий получается нужное количество материала для анализа. Современная аппаратура дает возможность многократно копировать ДНК даже одной клетки, например, сперматозоида.

Ход исследования

  • взятие биологического материала (крови, мочи, влагалищных выделений, слюны и так далее) у пациента и доставка в лабораторию;
  • разделение двух нитей ДНК, переплетение которых образует хромосому, и очищение их от посторонних примесей;
  • удвоение нужного участка нити ДНК, в результате ее количество растет в геометрической прогрессии;
  • обработка полученного материала растворами, вызывающими специфическое свечение полученных фрагментов ДНК, по этому окрашиванию распознают, какая бактерия или вирус были в источнике; для разделения фракций ДНК используют электрофорез.

Длительность анализа составляет 4-5 часов.



Преимущества метода ПЦР

Полимеразная цепная реакция обладает такими преимуществами перед традиционными способами определения возбудителей инфекции:

  • прямое определение генов микроорганизма, в отличие от выявления антител к нему при многих других способах идентификации;
  • специфичность, то есть определение конкретного вида возбудителя;
  • чувствительность: для диагностики бывает достаточно даже одной клетки микроорганизма; в целом требуемое количество возбудителя в 10 раз меньше, чем для других методов;
  • универсальность биоматериала – исследуется не только кровь, но и клетки плотных тканей, соскобы с эпителия, слизистые выделения и любые другие среды, где может быть микроб;
  • скорость получения результата в несколько раз выше, чем при использовании других методов;
  • возможность распознавания хронических, вялотекущих и скрытых инфекций;
  • дезинфекция взятого у больного материала и исключение заражения сотрудников лаборатории;
  • полная автоматизация процесса исследования.

Недостатки анализа

Минусы ПЦР связаны в основном с ее технической сложностью:

  • необходимо правильно выбрать последовательности РНК – праймеры, а также приготовить смесь нуклеотидов для синтеза ДНК;
  • метод очень чувствителен, поэтому если в образце есть разные виды микробов, он может давать неверные результаты;
  • нужно тщательно очищать анализируемый материал от примесей белков человека и лекарств, так как они снижают точность диагностики;
  • требуется контрольное сравнение результатов с образцами, заведомо содержащими или не содержащими материал микроорганизмов, а также вообще не включающими ДНК для определения ошибок и загрязнений.

Ложноотрицательные результаты ПЦР вызваны нарушением техники анализа и изменениями в генетической последовательности любого из компонентов реакции. Встречаются и ложноположительные данные – при случайном совпадении нуклеотидов праймеров и других применяемых реактивов с одним из генов микроорганизма.

Выделение микроорганизма не всегда говорит о том, что именно он стал причиной болезни. При анализе ДНК человека существует еще одна проблема: генетическая основа большинства заболеваний до сих пор неизвестна, что пока делает невозможной диагностику неинфекционной патологии на микробиологическом уровне. Это направление медицинской генетики очень активно развивается.

Показания для ПЦР-исследования

Этот анализ используется в таких ситуациях:

  • необходимость выявления и идентификации вирусов, бактерий, простейших при любых инфекционных заболеваниях, когда требуется точность диагностики;
  • диагностика генетических заболеваний человека;
  • идентификация личности путем сравнения с генетическим материалом известного происхождения;
  • анализ тканей, полученных путем тонкоигольной биопсии, которые очень трудно исследовать другими методами;
  • диагностика лейкозов и злокачественных опухолей;
  • проведение экспериментов с приживляемостью эмбриональных стволовых клеток у животных (у людей применение таких клеток запрещено), а также выведение линий лабораторных мышей с заранее заданным генетическим заболеванием.

Перспективы применения ПЦР-реакции и ее разновидностей в медицине и биологии захватывают воображение – от испытания новых лекарств на генном уровне до создания трансгенных организмов с заданными свойствами. Работы в этом направлении ведутся в крупнейших лабораториях мира, что помогает совершенствовать метод ПЦР и на прикладном уровне, для диагностики инфекционных болезней человека.

В медицине ПЦР-метод обычно используется для диагностики и оценки эффективности лечения таких заболеваний:

Подготовка к исследованию

За 3 дня до выполнения исследования необходимо отказаться от употребления спиртных напитков. По назначению врача отменяются некоторые лекарственные препараты, например, антибиотики.

Правила подготовки при диагностике половых инфекций:

  • за 2 дня до анализа прекратить половые контакты;
  • за 2 часа до исследования не мочиться;
  • накануне вечером и утром не спринцеваться; подмываться только теплой водой без моющих средств;
  • не сдавать ПЦР во время менструации и в течение 4 дней после кольпоскопии (у женщин).

Общие правила подготовки:


  • за 2 дня исключить интенсивные физические нагрузки, занятия спортом;
  • с утра в день исследования не курить и не употреблять пищу;
  • если материал будет браться из полости рта и носоглотки – утром не чистить зубы.

От выполнения этих простых правил зависит достоверность этого точного, но недешевого метода диагностики. Самостоятельная интерпретация результата не даст нужной информации о болезни и ее лечении. Вот поэтому после получения данных ПЦР-исследования необходимо обратиться к врачу.

К какому врачу обратиться

При подозрении на венерическое заболевание на ПЦР направляет гинеколог, уролог, андролог, венеролог. Исследование при гепатитах и ВИЧ-инфекции назначает инфекционист, при туберкулезе – фтизиатр. ПЦР в своей практике используют врачи многих специальностей, например, онкологи, гематологи, гастроэнтерологи, генетики.

Источник: http://myfamilydoctor.ru/pcr-analiz-chto-eto-takoe-pokazaniya-i-podgotovka-k-issledovaniyu/

ПЦР анализ: что это такое?

ПЦР диагностика (полимеразная цепная реакция) является одним из наиболее современных методов обследования в области молекулярной биологии и обладает некоторыми преимуществами перед другими методами.

Разберемся подробнее, ПЦР анализ – что это такое?



Из всех лабораторных исследований метод ПЦР принято считать одним из наиболее точных для диагностирования различных заболеваний, вызванных вирусами или бактериальными агентами. Кроме того, ПЦР диагностика становится доступнее с каждым днем, а повышенный уровень специфичности гарантирует точные и правильные результаты, исключая ложные ответы.

Полимеразная цепная реакция способна амплифицировать, проще говоря, увеличить во много раз необходимый участок ДНК возбудителя в исследуемом материале.

Кроме амплификации ДНК возбудителя, данный метод диагностики применяют для определения отцовства, клонирования генов, для выявления наследственных заболеваний и прочего.

Полимеразная цепная реакция способна амплифицировать, проще говоря, увеличить во много раз необходимый участок ДНК возбудителя в исследуемом материале

Какие заболевания возможно диагностировать с помощью ПЦР?

Так, что это такое: ПЦР анализ, и для чего применяют данный метод? Специалист может назначить проведение ПЦР для выявления разнообразных инфекций в организме бактериального или вирусного происхождения. Также с помощью ПЦР возможно обнаружить инфекции, имеющие хроническое течение или скрытое. ПЦР анализ эффективен даже если в организме находятся единичные клетки возбудителя.



В случае назначения ПЦР для выявления половых инфекций объектом могут быть хламидии, трихомонады, кандида, микоплазмы, уреаплазмы, возбудитель вируса папилломы и гонореи, гарднереллы.

Для определения возбудителя при поражении половых путей забор материала для ПЦР анализа производят с помощью мазка из влагалища, уретры или цервикального канала.

Для определения возбудителя при поражении половых путей забор материала для ПЦР анализа производят с помощью мазка из влагалища, уретры или цервикального канала

Перед планированием беременности или при ее наступлении будущим родителям необходимо сдать анализы для ПЦР диагностики на наличие инфекционных заболеваний. Ведь планирование беременности — очень важный период жизни для будущей мамы и малыша, поэтому нужно отнестись к зачатию ответственно. Если все же в организме женщины и мужчины были выявлены возбудители инфекций, лучше отложить планирование беременности на время лечения.

Кроме инфекций половых путей, с помощью ПЦР можно обнаружить и другие возбудители, такие как:


  • Наличие вирусов В и С в организме: ПЦР анализ поможет определить тип вируса, который является возбудителем гепатита еще до клинических проявлений заболевания; метод ПЦР поможет специалисту подобрать правильное лечение болезни и следить за его эффективностью;
  • Наличие возбудителей туберкулеза: данный метод обследования может выявить такие формы туберкулеза, которые не смогут определить прочие лабораторные анализы; назначают проведение ПЦР, если у человека присутствует соответственная симптоматика, например, повышается температура тела, в дыхательных путях начинаются воспалительные процессы, отмечается положительная реакция при проведении туберкулиновой пробы;
  • Вирус иммунодефицита человека;
  • Вирус Эпштейна-Барра и цитомегаловирус;
  • Хеликобактерии.

С помощью ПЦР можно обнаружить вирусы В и С в организме

Как проводится анализ ПЦР?

Для представления о том, что это такое — ПЦР анализ, необходимо знать, как проводится данное исследование.

После взятия материала для исследования, его перемещают в специальный аппарат, куда помещают специальные ферменты, способствующие формированию генетического материала. После этого начинается копирование ДНК и РНК вируса, пока тот не возрастет до количества, при котором будет возможно выявить возбудитель заболевания.

Материалом для проведения исследования в основном является кровь, но также используют мочу, мазок из зева и прочие материалы.

У женщин наиболее часто воспроизводят забор материала из цервикального канала и уретры. В данном случае для верного результата очень важно подготовиться к проведению процедуры. Подготовка включает в себя следующее:


  • За 3 суток до проведения анализа ПЦР женщине необходимо воздержаться от полового контакта;
  • Перед проведением процедуры не следует мочиться;
  • После окончания менструации должно пройти 4-5 дней перед исследованием.

Стоит отметить, что для взятия крови специальной подготовки не нужно.

Материалом для проведения исследования в основном является кровь, но также используют мочу, мазок из зева и прочие материалы

Ответы ПЦР

Расшифровка ответов обычно готова на следующий день. Существует всего два результата: положительный (в случае наличия в организме инфекции) и отрицательный (если ДНК возбудителя не обнаружено).

При ответе на вопрос, что это такое — ПЦР анализ, можно однозначно сказать, что важность данного лабораторного метода исследования сложно переоценить. Такая диагностика сможет контролировать проведение назначенной терапии при вирусах и инфекциях, отдельно в случаях гепатита и ВИЧ.

Источник: http://antirodinka.ru/ptsr-analiz-chto-eto-takoe

Что такое pcr сайта

Англо-русский толковый словарь генетических терминов. — М.: Изд-во ВНИРО . Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., науч. ред. Л.И.Патрушев . 1995 .



Смотреть что такое «PCR» в других словарях:

PCR-TR — PCR en temps réel Sommaire 1 Définition 2 Historique 3 Pourquoi quantifier en nombre de cycles? 4 Gamme d étalonnage … Wikipédia en Français

Pcr tr — PCR en temps réel Sommaire 1 Définition 2 Historique 3 Pourquoi quantifier en nombre de cycles? 4 Gamme d étalonnage … Wikipédia en Français

PCR — ● PCR puede referirse a la Reacción en cadena de la polimerasa, técnica de biología molecular, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular ● PCR también puede referirse a la Tasa Pico de Celdas en redes ATM … Enciclopedia Universal

PCR — [Abk. für engl. polymerase chain reaction = Polymerase Kettenreaktion]: eine zur Vervielfältigung von DNA Abschnitten entwickelte Reaktionssequenz, bestehend aus den Schritten: Trennung der Original DNA in zwei Einzelstränge, Markierung der zu… … Universal-Lexikon

PCR — iniciales de Polymerase Chain Reaction, reacción de la polimerasa en cadena, una técnica de Biología Molecular para copiar el DNA Diccionario ilustrado de Términos Médicos.. Alvaro Galiano. 2010. PCR 1. Abreviatura de … Diccionario médico

PCR — abbrev. polymerase chain reaction * * * PCR abbr. polymerase chain reaction. * * * … Universalium



PCR — abbr. Stands for polymerase chain reaction, the newest (at this writing) method of DNA analysis. Using PCR technique, it is possible to analyze a biological specimen that is one tenth the size of that required for the older RFLP method. It also… … Law dictionary

PCR — PCR. = polymerase chain reaction (см.). (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

PCR — PCR. См. полимеразная цепная реакция. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

PCR — ● PCR nom féminin (abréviation de l anglais polymerase chain reaction) Synonyme de amplification génique … Encyclopédie Universelle

PCR — (polymerase chain reaction) laboratory technique used to replicate segments of DNA by repeatedly splitting the DNA strands and duplicating them with a DNA polymerase enzyme (Molecular Biology) … English contemporary dictionary



Источник: http://genetic_terms_en_ru.academic.ru/4855/PCR

Что такое pcr сайта

English-Russian dictionary of computer abbreviations and terms . 2014 .

Смотреть что такое «PCR» в других словарях:

PCR-TR — PCR en temps réel Sommaire 1 Définition 2 Historique 3 Pourquoi quantifier en nombre de cycles? 4 Gamme d étalonnage … Wikipédia en Français

Pcr tr — PCR en temps réel Sommaire 1 Définition 2 Historique 3 Pourquoi quantifier en nombre de cycles? 4 Gamme d étalonnage … Wikipédia en Français

PCR — ● PCR puede referirse a la Reacción en cadena de la polimerasa, técnica de biología molecular, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular ● PCR también puede referirse a la Tasa Pico de Celdas en redes ATM … Enciclopedia Universal



PCR — [Abk. für engl. polymerase chain reaction = Polymerase Kettenreaktion]: eine zur Vervielfältigung von DNA Abschnitten entwickelte Reaktionssequenz, bestehend aus den Schritten: Trennung der Original DNA in zwei Einzelstränge, Markierung der zu… … Universal-Lexikon

PCR — iniciales de Polymerase Chain Reaction, reacción de la polimerasa en cadena, una técnica de Biología Molecular para copiar el DNA Diccionario ilustrado de Términos Médicos.. Alvaro Galiano. 2010. PCR 1. Abreviatura de … Diccionario médico

PCR — abbrev. polymerase chain reaction * * * PCR abbr. polymerase chain reaction. * * * … Universalium

PCR — abbr. Stands for polymerase chain reaction, the newest (at this writing) method of DNA analysis. Using PCR technique, it is possible to analyze a biological specimen that is one tenth the size of that required for the older RFLP method. It also… … Law dictionary

PCR — PCR. = polymerase chain reaction (см.). (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.



PCR — PCR. См. полимеразная цепная реакция. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

PCR — ● PCR nom féminin (abréviation de l anglais polymerase chain reaction) Synonyme de amplification génique … Encyclopédie Universelle

PCR — (polymerase chain reaction) laboratory technique used to replicate segments of DNA by repeatedly splitting the DNA strands and duplicating them with a DNA polymerase enzyme (Molecular Biology) … English contemporary dictionary

Источник: http://computer_abbr.academic.ru/2403/PCR

Что такое ПЦР?

Основные понятия, используемые в статье:

  • ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота — биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.
  • РНК – рибонуклеиновая кислота — биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев — нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.
  • Нуклеоти?ды — основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию — адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) — гуанин, цитозиновый (C) — цитозин, тиминовый (Т) — тимин, урациловый (U) — урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов — A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа — A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК — рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.
  • Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.



Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций и заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП).



Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике — для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ — вирусов папилломы человека; в пульмонологии — для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии — для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний — в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии — для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длинойбукв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.



После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняетсяциклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течениеминут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадияэлонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длитсямин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки.

Для взятия крови в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Источник: http://gepatit-c.ru/analizy/pcr.html

ПЦР анализ у мужчин

ПЦР анализ у мужчин – один из самых информативных методов диагностики инфекционных заболеваний. Он предполагает обнаружение заданного фрагмента ДНК в клиническом материале.

Как делают анализ ПЦР у мужчин?

Анализы методом ПЦР у мужчин базируются на определении бактериальной, вирусной, грибковой ДНК. Заданный фрагмент нуклеотидной последовательности обнаруживается и многократно копируется.

Исследование включает такие этапы:

  • Выделение ДНК (подготовка полученного от пациента клинического материала для исследования).
  • Амплификация ДНК (множественное копирование нуклеотидной последовательности).
  • Детекция – отделение продуктов амплификации путем добавления в смесь флуоресцирующих (светящихся) веществ.
  • высокая чувствительность – положительный результат возможен даже при наличииклеток в биоматериале;
  • высокая специфичность – обнаруживается только определенная последовательность ДНК, характерная для одного возбудителя инфекции;
  • прямое определение инфекционного агента, а не выявление косвенных признаков его пребывания в организме;
  • может использоваться любой биоматериал, полученный инвазивным или неинвазивным способом;
  • на диагностику требуется лишь несколько часов.

ПЦР анализ – как его берут у мужчин?

Как берется анализ ПЦР у мужчин, зависит от того, какой клинический материал он сдает.

В свою очередь тип биоматериала определяется:

  • подозрением на определенную инфекцию.

Чаще всего проводится ПЦР мазка у мужчин на урогенитальные инфекции. Его берут из уретры специальным зондом. Эта процедура в нашем медицинском центре проходит безболезненно. Собранный биоматериал помещается в транспортную среду и отправляется в клиническую лабораторию.

Альтернативой соскобу из уретры может служить другой клинический материал из органов мочеполовой системы. Часто проводится ПЦР в сперме у мужчин. В эякуляте может быть обнаружена инфекция в случае поражения яичек или придатков.

Нередко назначается ПЦР мочи у мужчин. Это исследование используется при подозрении на локализацию инфекции в мочевыделительной системе (почки, мочевой пузырь, мочеточники). Кроме того, оно позволяет заменить соскоб из уретры, если человек отказывается сдавать клинический материал. Часто пациенты спрашивают, чем отличается ПЦР мочи и мазка у мужчин. Отличия незначительные, но они все же существуют. Мазок более информативен, так как позволяет обнаружить возбудителей вирусных инфекций, например, ВПЧ. Моча же используется главным образом для диагностики ИППП бактериальной, грибковой или протозойной этиологии.

ПЦР секрета простаты у мужчин используется при подозрении на простатит. Биоматериал получают после ручной стимуляции предстательной железы. Несколько капель выделившегося через уретру секрета врач собирает в специальный контейнер. Если секрет не выделяется, это означает, что его количество низкое.

Тогда врач просит пациента помочиться и собрать первую порцию мочи. Она вымывает секрет простаты и в нем может быть обнаружена ДНК возбудителя инфекции. Иногда используется ПЦР мазок из ануса у мужчин.

Он необходим в таких случаях:

  • при наличии кондилом в аноректальной области;
  • при однополых сексуальных контактах в анамнезе (для диагностики проктита, вызванного возбудителями половых инфекций);
  • при обнаружении клинических признаков проктита.

ПЦР мазок изо рта у мужчин врач может взять для диагностики:

  • герпеса 1 или 2 типов;
  • папилломавирусной инфекции;
  • кандидоза;
  • половых инфекций (при наличии симптомов фарингита или тонзиллита).

Источник: http://prosifilis.ru/content/pcr-analiz-u-muzhchin

ПЦР: что это такое?

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

Специфичность и применение

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длитсямин.

Источник: http://ruslekar.info/PTSR-chto-eto-takoe-3175.html

Полимеразная цепная реакция — ПЦР  Что такое

Полимеразная цепная реакция — ПЦР  Что такое ПЦР?  Компоненты ПЦР» src=»http://present5.com/presentacii-2//25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies.ppt/25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies_1.jpg» alt=»>Полимеразная цепная реакция — ПЦР  Что такое ПЦР?  Компоненты ПЦР» /> Полимеразная цепная реакция — ПЦР  Что такое ПЦР?  Компоненты ПЦР  Принцип ПЦР  Историческая перспектива: развитие ПЦР и применения Taq-полимеразы  Технические аспекты ПЦР  «Вариации на тему ПЦР» различные протоколы на базе ПЦР количественный ПЦР в реальном времени (real time quantitative PCR)

Что такое ПЦР? Методика для «усиления» (получения многочисленных копий) специфического участка двухцепочной ДНК. В» src=»http://present5.com/presentacii-2//25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies.ppt/25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies_2.jpg» alt=»>Что такое ПЦР? Методика для «усиления» (получения многочисленных копий) специфического участка двухцепочной ДНК. В» /> Что такое ПЦР? Методика для «усиления» (получения многочисленных копий) специфического участка двухцепочной ДНК. В ходе ПЦР-реакции образуются в больших количествах два амплимера – участка ДНК, заданного гена. При расплавлении ДНК два праймера прикрепляются к комплиментарным участкам темплейта. Термостабильная ДНК-полимераза из Thermus aquaticus (Taq-полимераза) синтезирует комплиментарные участки амплимера, начиная от праймера. Каждый цикл включает нагрев для денатурации ДНК и частичного охлаждение для возможности прикрепления праймеров к темплейту, с которого снимается копия. При частичном охлаждении также Taq-полимераза синтезирует копию гена или его заданного участка. Каждый цикл удваивает количество ДНК до цикла.

Компоненты ПЦР  ДНК-темплейт, например, грубый клеточный экстракт, общая геномная ДНК, плазмидная ДНК и» src=»http://present5.com/presentacii-2//25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies.ppt/25550-lecture_5_gene_amp_amp_protein_technologies_3.jpg» alt=»>Компоненты ПЦР  ДНК-темплейт, например, грубый клеточный экстракт, общая геномная ДНК, плазмидная ДНК и» /> Компоненты ПЦР  ДНК-темплейт, например, грубый клеточный экстракт, общая геномная ДНК, плазмидная ДНК и т.д. (нанограммы)  Два олигонуклеотидных праймера обычно 20 нуклеотидов (20-mer), (бывает 18-30!) (д.б. Одинаковой температуры плавления Tm of

60°C)  dNTPs – деоксинуклеозид-трифосфаты (dATФ, dЦTФ, dГTФ, dTTФ)  ДНК-полимераза (и буффер) обычно Taq-ДНК-полимераза  ПЦР-буффер, обычно с Mg2+

Источник: http://present5.com/polimeraznaya-cepnaya-reakciya-pcr-%EF%80%B4-chto-takoe/

PageRank

12 ноября 2015 года. Опубликовано в разделах: Азбука терминов. 4652

Google PageRank — что это?

PageRank (PR) – это критерий оценки сайтов, применяемый поисковой системой Гугл. Данный показатель свидетельствует об авторитетности интернет ресурса с точки зрения Google. Основное отличие PageRank от тИЦ заключается в том, что этот показатель рассчитывается по отдельности для каждой страницы интернет проекта. При формировании значения учитывается внутренняя перелинковка, а также ссылки, ведущие с других сайтов.

Показатель PR связан с количеством ссылок, ведущих на сайт. Чтобы обеспечить прирост PageRank, можно размещать платные ссылки, выполнять регистрацию в «белых» каталогах, обмениваться гиперссылками с web-проектами аналогичной тематики. Достаточно эффективным методом считается публикация статей, содержащих ссылку на продвигаемый сайт.

Как проверить PR сайта – установка информера

При желании вы можете установить специальную кнопку-счетчик на страницы своего web-проекта. Это позволит вам проверить pagerank сайта, просто посетив свой ресурс. Получить код информера можно по этой ссылке http://mainspy.ru/schetchik_tic. Счетчик позволит не только проверить ПР сайта, но и продемонстрировать данный показатель посетителям (в том числе, потенциальным рекламодателям).

PR сайта — что это такое? Узнаем с помощью специализированных сервисов

Существуют специальные online-сервисы, позволяющие определить PageRank. Чтобы проверить PR, вы можете перейти по ссылке http://www.cy-pr.com/. Данный сервис предоставляет большое количество информации об интернет ресурсе:

  • окончание срока регистрации домена;
  • хостинг, IP адрес сервера;
  • скорость загрузки;
  • кодировка страницы;
  • видимость в поисковых системах и т.п.

Если вы пользуетесь браузером Firefox или Internet Exlplorer, то проверка PR страниц может быть выполнена с помощью специального приложения Google Toolbar.

Как узнать PageRank с помощью программ

Очень удобным инструментом для SEO анализа является бесплатная программа Site Auditor. Она позволяет узнать PR, а также проверить позиции интернет ресурса в поисковых системах. Кроме того, вебмастер сможет установить, сколько страниц сайта проиндексировано поисковиками. Необходимо завести имя домена в поле http:// чтобы определить PR сайта, проверка осуществляется в течение нескольких секунд.

Источник: http://semantica.in/blog/pagerank.html