Иммуноблот антител

Posted by

Иммуноблот антинуклеарных антител (в крови)



Ключевые слова: системная красная волчанка СКВ склеродермия синдром Шегрена люпоидный гепатит синдром Фелти кровь

Антинуклеарные антитела- иммуноблот (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ). — показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани.

Оглавление:

Представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза — системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.

При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела — AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.



При иммуноблоте определяются следующие антитела, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: анти-Sm, RNP, SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, PV-Sci, PCNA, к центромере B, Jo1, антитела к гистонам, нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2.

  1. 1. SS-A (Ro) — ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
  2. 2. SS-B (La) — ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
  3. 3. Scl-70 — белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
  4. 4. RNP/Sm — Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани — т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
  5. 5. PCNA — Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.
  6. 6. Jo-1 — фермент — синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
  7. 7. Ribo P – АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20% больных с СКВ. Эти антитела взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.
  8. 8. AMA-M2(антимитохондриальные антитела) – антитела выявляются в 90-95% случаев у больных с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), часто до проявления клинических признаков
  9. 9. CENP-B (Центромера) — для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
  10. 10. Нуклеосомы. Антитела к нуклеосомам чаще обнаруживаются при СКВ и склеродермии. Элементарной единицей упаковки хроматина является нуклеосома. Нуклеосома состоит из двойной спирали ДНК, обмотанной вокруг специфического комплекса из восьми нуклеосомных гистонов ( гистонового октамера ). Нуклеосома представляет собой дисковидную частицу с диаметром около 11 нм, содержащую по две копии каждого из нуклеосомных гистонов ( Н2А , Н2В , Н3 , Н4 ). Гистоновый октамер образует белковую сердцевину, вокруг которой дважды обмотана двуспиральная ДНК (146 нуклеотидных пар ДНК на гистоновый октамер).
  11. 11. Гистоны. Антитела к гистонам чаще при лекарственной волчанке. Гистоны образуют семейство белков, которые разделяются на пять больших классов, названных H1 , H2A , H2B , H3 и H4 . Они связаны с ДНК и помогают находиться ДНК в составе хромосом в компактном виде.

Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев.

Источник: http://old.smed.ru/guides/74698



Иммуноблот

Иммуноблот – это один из методов лабораторной диагностики, который широко используется в диагностике вирусных инфекций человека, в том числе и ВИЧ.

Иммуноблот считается наиболее точным методом, который превосходит даже ИФА (иммуноферментный анализ). То есть, результаты такого анализа являются окончательными, более точного способа для выявления вирусов в практической медицине, в настоящее время, не существует.

Как проводится исследование

С точки зрения пациента иммуноблот никак не отличается от любого другого анализа: берется венозная кровь, исследуется и получается результат. Но если вдаться немного подробнее методику, то она очень не простая, но все же попробуем разобраться.

Вначале, на заводе-производителе реактивов, берется «эталонный» вирус иммунодефицита человека. Затем при помощи специальной процедуры (электрофореза) в гелевой среде вирус разрушается до его мельчайших составляющих: белков (антигенов вируса). Затем при помощи самого блоттинга (от англ. промокания) частицы располагают на специальном материале — нитроцеллюлозе или нейлоновом фильтре, получается готовый к использованию индикатор, так называемый стрип. Стрип – это полоска, в которой антигены распределены в зависимости от своей молекулярной массы, в четкой последовательности, то есть каждому миллиметру бумаги соответствует определенный белок.



Как вы, возможно, знаете если в крови человека присутствуют вирусы, то организм начинает вырабатывать против их оболочек (определенных белков) антитела, при чем для каждого вируса имеется свой индивидуальный набор белков-антигенов. Выявление антител к белкам-антигенам в крови есть основа метода иммуноблот. Ведь если антитело сталкивается с антигеном, то они непременно взаимодействуют друг с другом – «прилипают».

Так вот, антигены находятся на стрип-полоске и в случае наличия в крови исследуемого подходящих антигенов они обязательно взаимодействуют друг с другом а в этом месте, на стрип полоске, проявится индикатор – появится плоска (как тест на беременность). Причем в конкретном месте полоски, таким образом врач поймет есть ли в крови набор белков характерных для того или иного вируса.

Так, к примеру, при наличии на полоске потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41 диагностируется ВИЧ, для других вирусов это будут совсем другой набор белков.

Нужно отметь, что иммуноблот позволяет точно установить наличие вируса только в том случае, если набор антител в крови является полным, то есть если белки gp160, gp120, gp41 присутствуют одновременно, то это 100% ВИЧ инфекция. А вот если хотя бы одного нет, к примеру: gp41 отсутствует, а есть только gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторения.

Источник: http://immuninfo.ru/medinfo/immunoblot/

Иммуноблот антинуклеарных антител (в крови)

Антинуклеарные антитела- иммуноблот (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ). — показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. Представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза — системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.



При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела — AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.

При иммуноблоте определяются следующие антитела, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: анти-Sm, RNP, SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, PV-Sci, PCNA, к центромере B, Jo1, антитела к гистонам, нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2.

  • SS-A (Ro) — ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ. SS-B (La) — ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ. Scl-70 — белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев). RNP/Sm — Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани — т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев). PCNA — Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки. Jo-1 — фермент — синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит). Ribo P – АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20% больных с СКВ. Эти антитела взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом. AMA-M2(антимитохондриальные антитела) – антитела выявляются в 90-95% случаев у больных с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), часто до проявления клинических признаков CENP-B (Центромера) — для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов. Нуклеосомы. Антитела к нуклеосомам чаще обнаруживаются при СКВ и склеродермии. Элементарной единицей упаковки хроматина является нуклеосома. Нуклеосома состоит из двойной спирали ДНК, обмотанной вокруг специфического комплекса из восьми нуклеосомных гистонов ( гистонового октамера ). Нуклеосома представляет собой дисковидную частицу с диаметром около 11 нм, содержащую по две копии каждого из нуклеосомных гистонов ( Н2А , Н2В , Н3 , Н4 ). Гистоновый октамер образует белковую сердцевину, вокруг которой дважды обмотана двуспиральная ДНК (146 нуклеотидных пар ДНК на гистоновый октамер). Гистоны. Антитела к гистонам чаще при лекарственной волчанке. Гистоны образуют семейство белков, которые разделяются на пять больших классов, названных H1 , H2A , H2B , H3 и H4 . Они связаны с ДНК и помогают находиться ДНК в составе хромосом в компактном виде.
  • Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

    AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

    

    Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев.

    Люпоидный гепатит (новое название — хронический аутоиммунный гепатит)

    Синдром Фелти (Felty. 1924 г.) — ревматоидный артрит + спленомегалия + нейтропения + лейкопения + лимфоаденопатия.

    Лекарственный волчаночныи синдром (гидралазин, прокаинамид, изониазид)

    Синдром Шегрена (Аутоиммунное системное поражение соединительной ткани. Характеризуется вовлечением в патологический процесс желез внешней секреции, главным образом слюнных и слезных, и хроническим прогрессирующим течением ).

    Клинически здоровые родственники пациента с СКВ

    Дискоидная красная волчанка

    Хронический ювенильный артрит

    Дерматомиозит и полимиозит

  • После венепункции набирают кровь в пустую пробирку или с разделительным гелем. Место венепункции придавливают ватным шариком до остановки кровотечения. При образовании гематомы в месте венепункции назначают согревающие компрессы. Дифференциальная диагностика системных/ревматоидных заболеваний.

    Антинуклеарные антитела- иммуноблот (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ). — показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. Представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза — системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.

    При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела — AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

    При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.

    При иммуноблоте определяются следующие антитела, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: анти-Sm, RNP, SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, PV-Sci, PCNA, к центромере B, Jo1, антитела к гистонам, нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2.

    1. 1. SS-A (Ro) — ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
    2. 2. SS-B (La) — ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
    3. 3. Scl-70 — белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
    4. 4. RNP/Sm — Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани — т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
    5. 5. PCNA — Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.
    6. 6. Jo-1 — фермент — синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
    7. 7. Ribo P – АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20% больных с СКВ. Эти антитела взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.
    8. 8. AMA-M2(антимитохондриальные антитела) – антитела выявляются в 90-95% случаев у больных с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), часто до проявления клинических признаков
    9. 9. CENP-B (Центромера) — для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
    10. 10. Нуклеосомы. Антитела к нуклеосомам чаще обнаруживаются при СКВ и склеродермии. Элементарной единицей упаковки хроматина является нуклеосома. Нуклеосома состоит из двойной спирали ДНК, обмотанной вокруг специфического комплекса из восьми нуклеосомных гистонов ( гистонового октамера ). Нуклеосома представляет собой дисковидную частицу с диаметром около 11 нм, содержащую по две копии каждого из нуклеосомных гистонов ( Н2А , Н2В , Н3 , Н4 ). Гистоновый октамер образует белковую сердцевину, вокруг которой дважды обмотана двуспиральная ДНК (146 нуклеотидных пар ДНК на гистоновый октамер).
    11. 11. Гистоны. Антитела к гистонам чаще при лекарственной волчанке. Гистоны образуют семейство белков, которые разделяются на пять больших классов, названных H1 , H2A , H2B , H3 и H4 . Они связаны с ДНК и помогают находиться ДНК в составе хромосом в компактном виде.

    Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

    AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

    Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев.

    Источник: http://amkdoc.ru/stati/6/1603/

    Антинуклеарные антитела (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот

    Специфичные аутоантитела к различным компонентам клеточного ядра, которые образуются при некоторых тяжелых аутоиммунных патологиях и имеют большое значение в диагностике системных ревматических заболеваний.

    Для чего используется этот анализ?

    • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
    • При выявлении антинуклеарных антител, антинуклеарного фактора в крови.

    Специфичные АНА, антитела к экстрагируемым ядерным (нуклеарным) антигенам.

    Antinuclear Antibodies (ANA) Comprehensive Profile, ANA-specific Antibodies, Extractable Nuclear Antigen Antibodies (ENA Panel).

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

    Общая информация об исследовании

    Антинуклеарные антитела (АНА) к экстрагируемым ядерным антигенам представляют собой антитела к растворимым компонентам ядра клетки (рибонуклеопротеинам). В норме АНА отсутствуют в организме. При аутоиммунной патологии иммунная система начинает вырабатывать специфические иммуноглобулины к собственным клеткам и их компонентам.

    Основной метод определения специфичности антител при положительном антинуклеарном факторе – это иммуноблотинг, позволяющий дифференцировать системные заболевания соединительной ткани. Данный метод исследования дает возможность одновременно выявить антитела к нескольким различным внутриклеточным антигенам, которые могут встречаться как сочетанно, так и изолированно.

    Анти-Sm (Smith) – антитела к U1-, U2-, U4-рибонуклеопротеинам – специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Они редко встречаются при других системных заболеваниях соединительной ткани и являются одним из критериев диагностики СКВ. При этом, однако, концентрация анти-Sm не коррелирует с активностью системной красной волчанки.

    Антитела к антигенам RNP (anti-ribonucleoprotein) – это антитела к белковым компонентам малого ядерного нуклеотида – U-1-РНК. Они обнаруживаются при смешанных заболеваниях соединительной ткани (синдроме Шарпа), реже при системной красной волчанке и других ревматических заболеваниях.

    Антитела к SS-A (Ro) направлены на белки, связанные с РНК Y1-Y5 в составе сплайсосомы. Эти антитела наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена и системной красной волчанке. При СКВ их продукция ассоциируется с определенным набором клинических проявлений и лабораторных нарушений: светочувствительностью, синдромом Шегрена, гиперпродукцией ревматоидного фактора. Присутствие анти-SS-A-антител в крови беременной женщины связано с высоким риском развития неонатального волчаночного синдрома у ребенка.

    Анти-SS-B(La)-антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3, выявляются при болезни Шегрена и в начальном периоде системной красной волчанки, развивающейся в пожилом возрасте и ассоциирующейся с низкой частотой развития нефрита.

    Антитела к Scl-70 (антисклеродермальные антитела с молекулярной массой 70 кДа, антитела к топоизомеразе I) чаще появляются при диффузной (40 %), реже при ограниченной (20 %) форме системной склеродермии, CREST-синдроме. Они высокоспецифичны для склеродермии и являются плохим прогностическим признаком относительно развития легочного фиброза.

    Антитела anti-PM/Scl – специфический серологический маркер для подгруппы больных склеродермией (Scl), полимиозитом (PM) и особенно для тех, у кого наблюдается совокупность симптомов обоих заболеваний (PM/Scl).

    Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.

    Антицентромерные антитела (анти-CENT-B) обнаруживаются у больных склеродермией, системной красной волчанкой и ревматоидным артритом. У больных системной склеродермией выявление данных антител указывает на благоприятный прогноз и низкую вероятность поражения внутренних органов.

    Анти-Jo-1-антитела (антитела к гистидин-тРНК-синтетазе) впервые были обнаружены в сыворотке крови больных миозитом. У большинства больных с повышенным уровнем антисинтетазных антител выявляется интерстициальная болезнь легких, феномен Рейно. Данное исследование может быть использовано как прогностический маркер прогрессирования болезни.

    Антитела к гистонам представляют собой одну из разновидностей антитуклеарных антител и определяются в основном при системной красной волчанке, являясь ее ранними маркерами.

    Антитела к нуклеосомам – чувствительный маркер системной красной волчанки. Они определяются исключительно при СКВ, нередко осложненной поражением почек (люпус-нефритом).

    АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у% больных с СКВ. Они взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы, почек и печени. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.

    Анти-AMA-M2 – антитела к антигенам митохондрий М-2, расположенным на внутренней мембране органеллы в виде комплекса ферментов. Данные антитела синтезируются при первичном билиарном циррозе и указывают на его тяжелое течение.

    Некоторые разновидности АНА встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах. Например, антитела к SS-A и SS-B или к RNP и Sm-антигенам часто выявляются совместно, поскольку входят в один белковый комплекс, выступающий антигеном для данных типов аутоантител.

    Для чего используется исследование?

    • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани;
    • для мониторинга течения и оценки прогрессирования ревматических заболеваний;
    • для дифференциальной диагностики некоторых аутоиммунных заболеваний.

    Когда назначается исследование?

    • При выявлении антинуклеарного фактора и антинуклеарных антител в крови;
    • при симптомах аутоиммунных заболеваний (длительное повышение температуры тела, потеря массы тела, миалгии, артропатии, фоточувствительность, синдром Рейно (побледнение с последующим посинением и покраснением сосудов пальцев кистей и стоп), лейкопения и гемолитическая анемия);
    • при мониторинге течения системных заболеваний соединительной ткани.

    Референсные значения: отрицательно.

    Причины повышения специфичных АНА

    • Системная красная волчанка (у% пациентов)
    • Смешанное заболевание соединительной ткани (редко)
    • Синдром Шегрена (редко)
    • Смешанное заболевание соединительной ткани (%)
    • СКВ (25-50 %)
    • Склеродермия (30 %)
    • Синдром Шегрена (15%)
    • Ревматоидный артрит (10 %)
    • СКВ (15-35 %)
    • Неонатальный волчаночноподобный синдром (100 %)
    • Склеродермия (60 %)
    • Ревматоидный артрит (10 %)
    • Синдром Шегрена (40-75 %)
    • Смешанное заболевание соединительной ткани (менее 5 %)
    • Склеродермия, диффузная форма (20-60 %) в сочетании с легочным фиброзом
    • CREST-синдром
    • Изолированный синдром Рейно с последующим развитием склеродермии
    • Полимиозит, дерматомиозит (антитела выявляются у половины больных) в сочетании с легочным фиброзом

    Антитела к гистонам

    Антитела к нуклеосомам

    • СКВ, ассоциированная с люпоидным церебритом (волчаночным психозом)

    Что может влиять на результат?

    • Лекарственные препараты, способные повышать уровень Scl-70: аминосалициловая кислота, изониазид, метилдопа, пенициллин, пропилтиоурацил, стрептомицин, тетрациклин.
    • Антитела к гистонам могут появляться при лекарственной волчанке, вызванной приемом гидралазина, прокаинамида, хинидина.
    • Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, в сочетании с клиническими данными. Системное аутоиммунное заболевание при отсутствии клинической картины не может быть диагностировано только на основании выявления специфичных антинуклеарных антител.
    • Отрицательный результат иммуноблота не исключает системного аутоиммунного заболевания соединительной ткани.

    Кто назначает исследование?

    Источник: http://helix.ru/kb/item/13-063

    Иммуноблот на сифилис

    Иммуноблот на сифилис – относительно новый метод серологического исследования крови. В последние годы получил развитие и активное применение с целью эффективной и надежной диагностики сифилиса.

    Иммуноблот – современный высокоточный безопасный диагностический тест, позволяющий с точностью подтвердить или опровергнуть диагноз сифилитической инфекции. С помощью данного метода в плазме крови определяется наличие и уровень антител (Ig М и Ig G), которые иммунная система человека продуцирует в ответ на внедрение инфекции.

    Кроме того, анализ отличает высокая чувствительность и специфичность при стертом бессимптомном течении сифилиса. Иммуноблот используется только с диагностической целью и не подходит для контролирования процесса лечения.

    Описание метода

    Иммуноблот относится к группе так называемых «трепонемных тестов», при выполнении которых используют специфические антигены, характерные только для возбудителя сифилиса – бледной трепонемы. Тогда как «нетрепонемные тесты» могут обнаруживать антитела на липоидный антиген возбудителя или тканей самого человека и показывать положительный результат при отсутствии инфекции в организме.

    В ходе линейного иммуноблотинга бледную трепонему (выделенную из инактивированных штаммов или при помощи генной инженерии) способом гелевого электрофореза разделяют на специфические растворимые антигены (белки), глико- и липопротеины согласно их молекулярным размерам. Затем разделенные белки (антигены) транспортируют на специальную нитроцеллюлозную мембрану, где происходит обработка точек исследуемой сывороткой крови и иммуноглобулинами.

    Если антитела присутствуют в крови больного, на тесте образуются полоски. Учитывая визуально их расположение и интенсивность, судят о результатах.

    Критерии оценки анализа

    • Отрицательный: для антител класса IgG и IgМ – полос нет;
    • Неопределенный: для антител класса IgМ – одна нечеткая полоса, для IgG – одна четкая полоса;
    • Положительный: для антител класса IgМ – одна и более четкая полоса, для IgG – две и более четкие полосы.

    Расшифровка результатов

    Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании. Последующий положительный анализ на определение IgG, проведенный на 1-1,5 месяца позже, подтверждает данный факт.

    Наличие IgM у новорожденных детей указывает на диагноз сифилитической инфекции, так как передача материнских IgM через плаценту во время беременности исключена.

    Отрицательный ответ говорит о том, что заражение сифилисом пациента не произошло или же тест был проведен ранее, чем успела отреагировать иммунная система.

    В случае неопределенной интерпретации результатов анализ целесообразно повторить через определенное время (не раньше, чем через 7 дней), или же провести тестирование на наличие IgM к другим белкам бледной трепонемы. Как правило, такое состояние возникает у лиц с перенесенным сифилисом в анамнезе и определяется термином «серорезистентность».

    Вероятность развития ложноположительных реакций сравнительно низка.

    Преимущество иммуноблота перед остальными тестами состоит прежде всего в том, что иммунная реакция «антиген-антитело» зависит от молекулярной массы белка, и не требует участия дорогостоящих технологий. Кроме того, на результат иммунного ответа не влияет определенные свойства субстрата, нестабильность и отсутствие растворимости некоторых антигенов.

    В одном анализе можно выявить реакцию антител с более, чем одним антигеном, что в сложных диагностических ситуациях имеет большую ценность. Также метод прост в исполнении и позволяет определить IgG и IgМ отдельно друг друга, если это необходимо.

    Иммуноблот показывает высокую эффективность по выявлению иммунного ответа организма, как при получении антибактериальной терапии, так и без нее.

    Используемые антигены

    Для проведения тестирования применяют 5 основных антигенов:

    • 47 кДа мембранный белок (TpN47) – специфичный;
    • 45 кДа (TmpA) – специфичный;
    • 22 кДа (Р 22) – неспецифичный;
    • 17 кДа мембранный белок (TpN17) – специфичный;
    • 15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный.

    Считается, что выявление антител к протеинам именно с такой молекулярной массой является диагностически значимым для сифилиса.

    Один из антигенов Р 22 является неспецифичным для бледной трепонемы, именно поэтому появление полосы на этом белке может обусловить ложноположительный результат обследования.

    Состояния, при каких показано обследование методом иммуноблота

    • Наличие клинических признаков заболевания;
    • Положительные или сомнительные результаты предыдущих серологических исследований, особенно при следующих заболеваниях и состояниях: туберкулез, онкологический процесс, болезнь Лайма, сахарный диабет, вакцинация, наркозависимость, хронический алкоголизм, гиперлипидемия, беременность, возраст старше 70 лет и т.д.
    • Подозрение на первичный и вторичный сифилис при отрицательных ответах других тестирований;
    • Подозрение на сифилис на фоне приема антибиотиков, других антисептических препаратов;
    • Подозрение на скрытый сифилис;
    • Все язвенные поражения органов половой системы;
    • Половой контакт с больным сифилисом в анамнезе;
    • Наличие сопутствующего венерического заболевания;
    • Врожденная форма сифилиса;
    • Нейросифилис;
    • Сифилис внутреннего уха;
    • ВИЧ-инфекция;
    • Сопутствующие аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, системная склеродермия, сахарный диабет и т.д.)

    Сроки определения противотрепонемных антител

    Специфические антитела против возбудителя сифилитической инфекции (Ig M) появляются в организме спустя 7-14 дней после инфицирования с максимальным уровнем на 6-9 неделе. Исчезают черезмесяцев у лиц, не получавших антибактериальную терапию, через 3-6 месяцев – после проведения полноценного курса лечения. Их можно обнаружить у пациентов, как с первичным, так и с вторичным сифилисом, что позволяет уточнить старая это инфекция или свежая. Однако при стертом течении заболевания IgM не идентифицируются.

    Противотрепонемные антитела класса Ig G появляются позже, примерно к концу первого месяца инфекционного заболевания и обычно сохраняются на протяжении долгого времени или всей жизни. Их концентрация постоянно растет и максимально фиксируется через 1-2 года после первой встречи организма с бледной трепонемой.

    К моменту появления первых признаков болезни в крови больного можно выявить оба класса антител.

    Появление IgM снова в крови больного свидетельствуют о повторном заражении сифилисом, его рецидиве или неэффективной лечебной тактике.

    Подготовка к правильной сдаче анализа

    Определенной подготовки к проведению теста не требуется. Среди общих рекомендаций – взятие образца крови не ранее чем через 24 часа после употребления алкоголя, воздержание от курения, прием пищи за 4 и более часов.

    Источник: http://stojak.ru/venericheskie-zabolevaniya/sifilis/immunoblot-na-sifilis.html

    Иммуноблоттинг (выявление антител в сыворотках больных к определенным антигенам возбудителя)

    Иммуноблоттинг (иммуноблот) — высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в т.ч. при помощи РИГА или ИФА. Иммуноблоттинг — разновидность гетерогенного иммунного анализа.

    Этот метод выявления антител к отдельным антигенам возбудителя основан на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах, на которые в виде отдельных полос нанесены специфические белки, разделенные гель-электрофорезом. Если имеются антитела против определенных антигенов -появляется темная линия в соответствующем локусе стрипа. Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов.

    Материалом для исследования является сыворотка или плазма крови человека. Для исследования на одном стрипе необходимо 1,5-2 мл крови илимкл сыворотки.

    ООО "Лабораторная диагностика" использует иммуноблоттинговые наборы для выявления антител к возбудителям различных заболеваний фирмы "EUROIMMUN" (Германия), "MIKROGEN" (Германия):

    • ЦМВ IgM/IgG(цитомегаловирусная инфекция)

    • TORCH-профиль IgM(Токсоплазмоз, Краснуха, Цитомегаловирус, ВПГ 1 и ВПГ 2)

    • ВЭБ IgMTIgG(вирусная инфекция Эпштейна-Барра)

    Используют наборы двух типов — вестерн-блот и лайн-блот.

    Вестерн-блот:Наборы содержат тестовые стрипы-мембраны с электрофоретически разделенными нативными антигенами соответствующих инфекционных агентов, т.о. антигены располагаются в порядке молекулярной массы . На мембраны могут быть также нанесены 1-2 дополнительные линии с клинически значимыми антигенами (вестерн-лайн блот). Это надежный подтверждающий метод, исключает ложноположительные ответы и перекрестные реакции.

    Лайн-блот:В этом случае на тестовые стрип-мембраны нанесены только клинически значимые антигены (нативные, синтетические или рекомбинантные) в определенном порядке. Такой подход используется при дифференциальной диагностике нескольких инфекций на одном стрипе .

    Сущность его заключается в переносе молекул исследуемого вещества с одного твердого носителя, используемого для фракционирования биополимеров, на другой, где с помощью иммунохимической реакции происходит их специфическое выявление. Современный высокочувствительный метод заключается в идентификации белков, в том числе вирусных антигенов. Метод основан на комбинации гель-электрофореза и реакции антиген-антитело. Высокая степень разрешения достигается за счет электрофоретического разделения белков, глико- и липопротеинов и максимальной специфичностью детектирующих иммунных сывороток или моноклональных антител. В оптимально отработанных условиях иммуноблотингом можно обнаруживать антиген в количествах менее 1 нг в испытуемом объеме. Технически иммуноблотинг выполняется в три приема:

    1) подлежащие анализу белки подвергаются разделению в полиакриламидном геле в присутствии денатурирующих веществ: додецилсульфата натрия или мочевины, этот процесс часто обозначают как SDS-PAGE; разделенные белки могут визуализироваться после окрашивания и сравниваться с эталонными образцами;

    2) разделенные белки переносятся с геля путем наложения (блотинга) на

    нитроцеллюлозный фильтр и фиксируются на нем; во многих случаях, но

    не всегда, при переносе сохраняются количественные соотношения белков;

    3) на фильтры наносятся детектирующие поли- или моноклональные

    антитела, содержащие радиоизотопную или ферментную метку; для

    обнаружения связавшихся антител применяют также антивидовую

    меченую сыворотку, иными словами, на заключительном этане блотинг

    аналогичен твердофазным иммунологическим тестам.

    Следует иметь в виду, что в данной постановке иммуноблотинга белки находятся в денатурированном состоянии, и поэтому могут не распознаваться антителами, специфическими по отношению к нативному белку, но зато при наличии сывороток ко всем составляющим пептидам одновременно выявляется весь антигенный спектр испытуемого белка. Иммуноблотинг достаточно широко используется в исследованиях строения вирусов гепатитов, в частности, для установления антигенного родства между отдельными штаммами. Высокая разрешающая способность иммуноблотинга позволяет получать хорошие результаты и в диагностической практике, когда требуется идентифицировать вирус в тканях или экскретах больного.

    В зависимости от исследуемого вещества различают ДНК,— РНК и белок — блоттинг.

    Иммунохимическое выявление антигенов можно проводить с помощью антител, конъюгированных с меткой. В качестве метки в последнее время широко применяют либо радиоактивные изотопы, либо ферменты (пероксидазу, щелочную фосфатазу, лактамазу и др.).

    Время блоттинга путем диффузии составляет 36—48 ч. Но наиболее быстрый и эффективный способ переноса белков с гелей — электроблот, время которого, в основном, составляет 1—3 ч , для некоторых высокомолекулярных белков— более 12 ч.

    Конкретный выбор сорбентов для различных модификаций блотов (нитроцеллюлоза либо бумага, обработанная соответствующим образом), выбор условий блокирования и иммуно-химического выявления антигенов полностью зависит от антигена, его количества, метода иммуноанализа и целей исследования.

    Возможность обнаружить антитела к конкретным антигенам возбудителя позволяет оценить значимость этих антител (специфичность для данного этиологического агента), исключить реакцию на перекрестные антигены. Это и отличает иммуноблоттинг от ИФА, где в качестве антигена могут быть использованы различные комбинации антигенных детерминант — как специфичные, так и нет, дающих перекрестные реакции с другими возбудителями. В другом случае, при получении положительного результата в ИФА можно только предполагать, что он является следствием перекрестного реагирования, а в случае иммуноблоттинга это доказательно

    Метод ИБ по целому ряду обстоятельств получил наибольшее распространение как метод, пригодный для использования в качестве теста подтверждения.

    Безусловное достоинство метода — возможность тестирования антител к слабо или вовсе нерастворимым антигенам и исключение стадии введения радиоактивной метки в антигены.

    О чувствительности в случае ИБ судят по предельному количеству нанесенного на гель антигена, которое при фракционировании белков удается выявить иммунохимически после переноса с геля на твердую фазу (нитроцеллюлозу). Общая чувствительность анализа зависит от целого ряда причин: условий фракционирования и иммобилизации антигена на твердом носителе, уровня фона, специфичности и аффинности антител. Важное значение имеет вид используемой метки и способ ее выявления.

    Таким образом, метод иммуноблотинга позволяет идентифицировать зоны антигена на твердой фазе, не связывая весь белок с антителами специфической сыворотки. Иммуноблотинг и его модификации в основном используются для типирования бактериальных и вирусных антигенов и антител, особенно в случае недостаточной разрешающей способности обычных систем, а также при анализе иммуноглобулинов, нуклеиновых кислот или как тест подтверждения в сочетании с другими методами.

    Большие трудности интерпретации результатов перекресных при реакциях и в случаях начальных стадий сероконверсии. В первой ситуации при повторном исследовании через промежуток определенный времени антитела не выявляются, а во в втором иммуноблоте появляются новые полосы, свидетельствующие о антител появлении к протеинам или гликопротеидам ВИЧ, характеризуя ответной динамику иммунной реакции на антигены вируса.

    Является фактически конечным верификационным методом в цепи серологических исследований, позволяющих сделать окончательное заключение о ВИЧ-позитивности пациента или же отвергнуть таковую. Для постановки ИБ используют нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофореза заранее перенесены белки ВИЧ в порядке нарастания их молекулярных масс. Антитела испытываемых сывороток взаимодействуют с белками определенных зонах полоски. Дальнейший ход реакции не отличается от такового для ИФА, то есть предусматривает обработку полоски (стрипа) конъюгатом и хромоген-субстратом с отмыванием не связавшихся компонентов и прекращением реакции дистиллированной водой. Предварительное электрофоретическое разделение белков и их фиксация на нитроцеллюлозе позволяет идентифицировать антитела к конкретным белкам в соответствии с наличием (или отсутствием) окрашивания (серовато-голубого) соответствующих зон полоски. Иммуноблотинг не может использоваться для массового скрининг исследования вследствие высокой стоимости и является методом индивидуального арбитража на заключительном этапе серологического исследования.

    Существует достаточно четкие корреляции между результатами исследования сывороток в ИБ и ИФА. Дважды положительные в ИФА (в разных тест-системах) сыворотки интерпретируются затем в ИБ как ВИЧ-позитивные в 97-98% случаев. Сыворотки, положительные в ИФА лишь в одной из двух использованных тест-системах, оказываются ВИЧ-позитивными в ИБ не чаще, чем в 4% случаев. При проведении подтверждающих исследований около 5% ИБ могут давать так называемые "неопределенные" результаты, которым, как правило, соответствуют положительные ИФА, но не РИП. Примерно в 20% случаев "неопределенные" ИБ вызывают антитела к gag- белкам ВИЧ-1 (р55, р25, р18). [3] При получении сомнительных результатов иммуноблотинга необходимо исследование повторить через 3 месяца и при сохранении неопределённости результата — через 6 месяцев.

    Радио-иммунный метод (РИМ)(Радиоиммунологический анализ, РИА) Радиоиммунный анализ — метод количественного определения биологически активных веществ, (гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и др.) в биологических жидкостях, основанный на конкурентном связывании искомых стабильных и аналогичных им меченных радионуклидом веществ со специфическими связывающими системами. Последними чаще всего являются специфические антитела. В связи с тем, что меченый антиген добавляют в определенном количестве, можно определить часть вещества, которая связалась с антителами, и часть, оставшуюся несвязанной в результате конкуренции с выявляемым немеченым антигеном. Исследование выполняют in vitro. Для Р. а. выпускают стандартные наборы реагентов, каждый из которых предназначен для определения концентрации какого-либо одного вещества. Исследование проводят в несколько этапов: смешивают биологический материал с реагентами, инкубируют смесь в течение нескольких часов, разделяют свободное и связанное радиоактивное вещество, осуществляют радиометрию проб, рассчитывают результаты. Метод отличается высокой чувствительностью, его можно использовать в диагностике заболеваний сердечно-сосудистой, эндокринный и других систем, для установления причин бесплодия, нарушения развития плода, в онкологии для определения маркеров опухолей и контроля за эффективностью лечения, для определения концентрации в крови иммуноглобулинов, ферментов и лекарственных веществ. В ряде случаев исследования выполняют на фоне нагрузочных функциональных проб (например, определение содержания инсулина в сыворотке крови на фоне пробы на толерантность к глюкозе) либо в динамике (например, определение в крови половых гормонов на протяжении менструального цикла).

    С помощью коммерческого набора фирмы “ЭББОТТ” — Австрия II-I 125 удается выявлять HBsAg в концентрациях до 0, 1 нг/мл. К преимуществам метода можно отнести возможность стандартизации и автоматизации метода с получением ответов в цифровом выражении. Недостатком метода являются ограничения, определяемые режимом работы с радиоактивным материалом, и относительно короткий срок годности диагностического набора, что связано с распадом радиоактивной метки.

    Диагностические наборы для выявления различных антигенов вирусов гепатитов А, В и D и антител к ним выпускаются фирмой “Изотоп” (Ташкент) и некоторыми зарубежными фирмами (например, фирмой “ЭББОТТ”). В качестве твердой фазы применяются полистироловые шарики (“ЭББОТТ”) или пробирки (“Изотоп”). Для метки антител или антигенов чаще всего используется изотоп I 125, который имеет период полураспада 60 дней и высокую удельную радиоактивность. Измерение радиоактивной метки, т. е. излучения, проводится на специальных счетчиках — радиоспектрометрах. Подсчет радиоактивных импульсов как в контрольных, так и исследуемых образцах проводится в единое фиксированное время, обычно в течение 1 минуты. При анализе результатов реакции необходимо учитывать наличие фона радиоактивности, который может влиять на конечный результат реакции. Причинами повышенного фона могут быть: загрязнение контейнера или гнезда для пробы; неправильная настройка прибора; наличие источника сильного излучения вблизи прибора.

    Для подтверждения положительного результата, полученного при первичном скрининге образцов, рекомендуется повторное исследование РИА или в альтернативном тесте. При обнаружении HBsAg необходимо проводить конфирмационный тест.

    Таблица 1.Классификация вакцин

    Источник: http://megaobuchalka.ru/3/34045.html