Электрофорез белковых фракций

Posted by

Белковые фракции



Синонимы: Белковые фракции, Протеинограмма, Serum Protein Electrophoresis, SPE

Одним из основных компонентов крови является белок, который состоит из фракций (альбумина и нескольких видов глобулинов), образующих определенную формулу количественного и структурного соотношения.

Оглавление:

При воспалительных (острых и хронических) процессах, а также при онкологических патологиях формула белковых фракций нарушается, что позволяет оценить физиологическое состояние организма и диагностировать ряд серьезных заболеваний.

Общие сведения

Под действием электрического поля (на практике применяется электрофорез) белок разделяется на 5-6 фракций, которые отличаются по местоположению, подвижности, структуре и доле в общей белковой массе. Самая главная фракция (альбумин) составляет более 40-60% объема общего белка сыворотки крови.

Другие фракции представляют собой глобулины:

К ним относятся белки острой фазы (быстрого реагирования):


  • антитрипсин способствует фибриллогенезу (процессу формирования соединительной ткани);
  • липопротеины отвечают за доставку липидов к другим клеткам;
  • транспортные белки связывают и перемещают важные гормоны организма (кортизол, тироксин).

Также включают белки острой фазы:

  • макроглобулин активизирует защитные процессы организма при инфекционных и воспалительных поражениях;
  • гаптоглобин соединяется с гемоглобином;
  • церулоплазмин определяет и связывает ионы меди, нейтрализует свободные радикалы и является окислительным ферментом для витамина С, адреналина;
  • липопротеины обеспечивают перемещение жиров.

К этой группе относят белки:

  • трансферрин (обеспечивает перемещение железа);
  • гемопексин (препятствует потере железа);
  • комплементы (участвуют в иммунном отклике);
  • бета-липопротеины (перемещают фосфолипиды и холестерин);
  • некоторые иммуноглобулины (также обеспечивают иммунную реакцию).

Фракция включает важнейшие белки иммуноглобулины разных классов (IgА, IgМ, IgЕ, IgG), которые являются антителами и отвечают за местный иммунитет организма.

В результате развития острых или обострения хронических воспалительных заболеваний соотношение белковых фракций изменяется. Уменьшение количества того или иного вида белка может наблюдаться при иммунодефицитах, которые свидетельствуют о серьезных процессах в организме (аутоиммунные заболевания, ВИЧ, онкология и т.д.). Избыток зачастую свидетельствует о моноклональной гаммапатии (производство аномальных типов иммуноглобулинов). К последствиям гаммапатии можно отнести множественную миелому (рак плазматических клеток), макроглобулинемию Вальденстрема (опухоль костного мозга) и т.д. Также может возникнуть поликлональная гаммапатия (секреция аномального количества иммуноглобулинов). Результатом являются инфекционные болезни, аутоиммунные патологии, заболевания печени (например, вирусные гепатиты) и другие хронические процессы.

Показания

Исследование белковых фракций позволяет диагностировать синдром иммунодефицита, онкологические и аутоиммунные процессы.



Также врач может назначить протеинограмму в следующих случаях:

  • оценка тяжести течения воспалительных или инфекционных процессов (в острой и хронической форме);
  • диагностика заболеваний печени (гепатиты) и почек (нефротический синдром);
  • определение продолжительности заболевания, формы (острая, хроническая), стадии, а также контроль эффективности терапии;
  • диагностика моно- и поликлональных гаммапатий;
  • диагностика и лечение диффузных поражений соединительной ткани, в том числе коллагенозов (ее системное разрушение);
  • наблюдение пациентов с нарушенным метаболизмом, режимом питания;
  • мониторинг состояния больных с синдромом мальабсорбции (нарушение пищеварения и всасывания питательных компонентов);
  • подозрение на множественную миелому, характеризующуюся симптомами: хроническая слабость, лихорадка, частые переломы и смещения, ломота в костях, инфекционные процессы в хронической форме.

Исследование белковых фракций в крови (протеинограмма) выявляют концентрацию общего белка, количественное соотношение альбуминов и глобулинов.

Источник: http://www.diagnos.ru/procedures/analysis/serum-protein-electrophoresis

Сайт о физиотерапии

ЛЕЧЕНИЕ ФИЗИОТЕРАПИЕЙ

САНАТОРИИ С ЛЕЧЕНИЕМ | ФИЗИОТЕРАПИЯ

Альбумины и глобулины

Белки формируются за счет аминокислотных цепей, и представляют собой важную составляющую часть всех тканей и клеток организма. Организм человека насчитывает более 100 видов белковых молекул, выполняющих различные функции, например, гормоны, составляющие сыворотки крови — гемоглобин, иммуноглобулины, глобулины, альбумины и т.д.

Плазма крови человека насчитывает более 100 видов белковых фракций, из них 90 процентов составляют липопротеины, иммуноглобулины, альбумины, трансферрин, фибриноген, а также другие белки сыворотки крови, которые составляют незначительный процент. Синтезирование и выделение белков сыворотки крови выполняется двумя системами в организме человека:


  • печень — отвечает за выработку фибриногена и белков — альбуминов, большего процента альфа — и бета — глобулинов;
  • ретикулоэндотелиальная система в костном мозге и лимфатической системе — вырабатывает преимущественно иммуноглобулины.

Выделение белковых фракций можно выполнить разными способами, но наибольшей популярностью пользуется электрофорез белков крови и электрофорез белков мочи.

Разделение

Электрофорез белков разделяет белки сыворотки на альбумины и глобулины. Использование метода электрофореза белка позволило вывести диагностику на качественно новый уровень.

Альбумины — это наибольшая белковая молекула из всех фракций сыворотки крови человека. Количество альбуминов является зеркальным отражением протеинового статуса крови и многих внутренних органов.

Основная цель фракций альбумина — поддержание коллоидного осмотического давления, которое удерживает жидкую систему в пределах кровеносного русла. Исходя из этого, можно объяснить патогенез таких патологических состояний, как отеки, асцит, легочные отеки и т.д.

Глобулины подразделяются на следующие группы — альфа — 1, альфа — 2, бета 1 и бета 2, гамма — глобулины. Их количественное разделение в лаборатории возможно благодаря клиническому анализу — электрофорез. Составляющие компоненты всех фракций белков — глобулинов:


  • альфасодержат часть альфа — 1 анти — трипсина и тироксинсвязывающего глобулина;
  • альфасодержит компоненты гаптоглобина, церулоплазмина, HDL — и альфамакроглобулина;
  • Бета часть содержит компоненты трансферрина, комплемента и бета — липопротеидов;
  • Гамма часть содержит отличные виды антител — иммуноглобулины М, G, A, D, E.

Электрофорез белка с увеличением фракций альфа 1 и 2 свидетельствует об инициации воспалительного процесса в организме.

Наша норма

В норме электрофорез белка крови соответствует следующим данным:

Существует большое количество способов разделения белковых фракций по различных критериям, но самым распространенным методом фракционирования по праву является электрофорез. Данный лабораторный метод является единственным способом выявления парапротеинов в некоторых биологических средах организма, в частности, в моче и сыворотки крови. Электрофорез — это специальный клинический метод, обеспечивающий обнаружение любых изменений сывороточных белков, что является проявлением некоторых патологических состояний. Электрофорез — доступный метод для каждого нуждающегося в его проведении, а также электрофорез проводиться в каждой клинической лаборатории. Электрофорез и его достоинства — быстрые и точные результаты, приемлемая стоимость. Изменения, которые может обнаружить расшифровка:

  • изменение структуры белковой молекулы;
  • изменение количественного соотношения компонентов в молекуле белка.

Как это делается

Капиллярный электрофорез определяет некоторые виды белков в сыворотке крови, однако, определенные молекулы, кроме альбумина, не могут быть обнаружены данным клиническим методом. Для решения этой задачи измеряют белковые фракции или группы, например, альбумин, альфа 1 — альфа 2 — гамма глобулин и т.д. Уровень различных белковых фракций возможно определить выполняя измерение количества общего белка сыворотки крови, затем полученное число умножить на относительный процент каждой доли белковой группы. Все это можно выполнить быстрее и проще, используя аппарат HellabioScan.

Электрофорез сыворотки непременно должен выполняться совместно с измерением концентраций молекул иммунной системы — иммуноглобулины G, A, M. Варианты с большим содержанием иммуноглобулинов А и М, которые не могут быть отдельно изучены, следует отправить на повторный анализ, для исключения иммунофиксации небольших групп парапротеинов. Электрофорез белка сыворотки помогает выявить начало заболеваний печени и почек, генетические деформации, образование злокачественных опухолей и инициацию острых и хронических инфекций. Выделяют ряд «электрофоретических синдромов», которые выявляет расшифровка клинического анализа:



Повышение процента альфа1 — альфа2 — глобулинов, С- реактивного белка, фибриногена и некоторых острофазных белков сыворотки — это является явным проявлением острого воспаления с инициацией работы системы комплемента. Простой гематологический анализ, в случае острого воспаления, проявит лишь увеличение СОЭ и лейкоцитоз;

Умеренное возрастание альфа 2 и бета — глобулинов, гамма — глобулинов, незначительное снижение альбумина сыворотки — хроническое воспаление, коллагенозы, аллергические реакции, малигнизация доброкачественных новообразований, аутоиммунные заболевания;

Снижение абсолютного содержания белков — альбуминов сыворотки крови свидетельствует о тяжелых патологиях печени. Хронические гепатиты и циррозы печени — повышение относительного и абсолютного количества гамма — глобулинов. Если расшифровка электрофореграммы предоставляет данные о превышении гамма — глобулинов над альбуминами следует немедленно повторить анализ и пройти комплексное обследование;

Если расшифровка электрофореграммы свидетельствует о повышении уровня фильтрации белков на уровне почечных канальцев и селективной протеинурией (выведение вместе с мочой значительного количества белков — альбуминов и небольшого процента низкомолекулярных глобулинов) у пациента устанавливается диагноз «нефротический синдром». Одновременно с прогрессированием нефротического синдрома отмечается усиленный синтез в печени больших по размеру протеинов из группы альфа2 — глобулины, которые скапливаются в жидкой части крови, отчего формируется следующая картина — уменьшение количества альбумина, повышение альфа2 — глобулина;

Причины

Кроме нефротического синдрома существенные потери белков возможны при синдроме Лаэлла, ожогах, затрагивающих большую площадь кожного покрова, заболеваниях пищеварительной системы и т.д. В последнем случае расшифровка протеинограммы свидетельствует об уменьшении процента альбумина при параллельном равномерном возрастании всех фракций глобулинов. Регулировать уровень общего белка и альбумина в сыворотке крови, можно постоянно проводя электрофорез, при этом осуществлять введение препаратов, замещающих белковые элементы крови;

Выраженное снижение гамма — глобулиновой фракции свидетельствует о тяжелом иммунодефиците врожденного или приобретенного характера. По мнению специалистов для выявления полной картины заболевания следует провести дополнительное определение количества иммуноглобулинов G, А и М;

Электрофорез белков — единственный метод выбора, позволяющий выявить парапротеинемию, симптом, характерный для прогрессированного роста злокачественных и доброкачественных опухолей. В крови накопление моноклональных иммуноглобулинов и фрагментов их цепей (характерно для миеломной болезни и некоторых лейкозах), протеинограмма проявляет острый пик от альфа2 до гамма — глобулинов — М — градиент. Электрофорез белковых фракций мочи, проведенный одновременно, проявит подобный пик в такой же области. Для различия парапротеинов и определения белковых цепей показано проводить более совершенную модификацию электрофореза — иммунофиксацию. Для ее проведения производятся специальные гелевые пластины с наполнителем — антисывороткой.

Источник: http://fizterapia.ru/albuminyi-i-globulinyi/

Белковые фракции (электрофорез)

Общие сведения

Белки сыворотки крови при электрофорезе делятся на 5 фракций: альбумин, α1 – глобулины, α2 – глобулины, β – глобулины и γ – глобулины.

Альбумин – основная фракция белков сыворотки крови (58 – 70%).



В состав α1 – глобулинов входят следующие белки: α1-липопротеин, α1-антитрипсин, α1-антихимотрипсин, α1-кислый гликопротеин.

В состав α2-глобулинов входят: α2-макроглобулин, гаптоглобин, гемопексин, ан-титромбин III, церулоплазмин, тироксинсвязывающий глобулин.

Фракция β-глобулинов содержит β-липопротеины, трансферрин, компоненты комплемента, β2-микроглобулин, С-реактивный протеин.

γ-глобулины представлены в основном фибриногеном, иммуноглобулинами A, M, G, E, D; лизоцимом.

Показания к исследованию

• Острые и хронические воспалительные процессы



• Аллергические и стрессовые состояния

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки не требуется.

Необходимо перед исследованием отменить лекарственные препараты, влияющие на результат исследования.

Факторы, влияющие на результат исследования

• Лекарственные препараты (аллопуринол, аспаргиназа, азатиоприн, хлорпропамид, декстран, эстрогены, ибупрофен, изониазид, пероральные контрацептивы, фенитоин, преднизолон, вальпроевая кислота)

Источник: http://www.likar.info/analyse/Belkovye-fraktsii-elektroforez/



3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Метод основан на различии величины заряда белков сыворотки крови. Если нанести каплю сыворотки на полоску хроматографической бумаги, смоченной буферным раствором, и пропустить через эту полоску постоянный электрический ток, отдельные белки будут продвигаться в электрическом поле с различной скоростью. При рН=8,6 белки сыворотки крови движутся по направлению к аноду, поскольку они обладают в этих условиях отрицательным зарядом. Наиболее быстро движутся альбумины, затем 1- и 2-глобулины, далее  — глобулины и наконец  — глобулины.

АППАРАТУРА: Прибор для определения белков в крови методом электрофореза на бумаге состоит из выпрямителя, электрофоретической кюветы и денситометра.

Кюветы заполняются вероналовым буфером рН = 8,6. Нарезают из хроматографической бумаги полоски длиной 38 см., шириной 3 см., полоски смачивают буферным раствором и помещают в кювету. Ближе к отрицательному полюсу наносится сыворотка (0,01 мл), затем прибор включается в электрическую сеть.

Электрофоретическое разделение белков сыворотки на бумаге производится обычно в течениечасов при напряжении 150 Вт и силе тока 6-8 А. По истечении указанного срока бумажные полоски сушат в сушильном шкафу при температуре около 100 градусов в течение 5 мин., затем красят бромфеноловым синим. Остатки красителя, не связавшегося с белками, отмывают с полоски бумаги 10% уксусной кислотой.

Количественное определение белковых фракций проводится с помощью денситометра или путём экстрагирования спиртовым раствором щелочи с последующим определением концентрация краски фотоколориметрически.



Тема: Биохимия крови. Метаболизм гемоглобина. Занятие №2.

Минеральный состав крови чрезвычайно разнообразен и играет большую роль в жизнедеятельности организма, например, в процессе роста и развития ребенка обмен кальция и связанных с ним фосфатов. Снижение содержания кальция может сопровождаться повышением нервно-мышечной возбудимости, судорогами (тетания новорожденных). Развитию гипокальциемии у новорожденных способствует сахарный диабет у матери, недоношенность и т.д. Чрезмерные дозы витамина «Д» вызывают гиперкальциемию с отрицательными последствиями для организма.

Основным белком, осуществляющим снабжение тканей кислородом и освобождение их от углекислоты, является гемоглобин. В связи с этим, изучение обмена гемоглобина и определение его концентрации является чрезвычайно важным, а также актуальным является клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная).

2. Основные вопросы темы:

Минеральные составные части крови, значение их для организма.

Различают несколько фракций кальция: ионизированный кальций, кальций неионизированный, но способный к диализу, и недиализирующийся (недиффундирующий), связанный с белками кальций.

Кальций принимает активное участие в процессах нервно-мышечной возбудимости (как антагонист ионов К + ), мышечного сокращения, свертывания крови, образует структурную основу костного скелета, влияет на проницаемость клеточных мембран и т.д.



Отчетливое повышение уровня кальция в плазме крови наблюдается при развитии опухолей в костях, гиперплазии или аденоме паращитовидных желез. В таких случаях кальций поступает в плазму из костей, которые становятся ломкими.

Важное диагностическое значение имеет определение уровня кальция при гипокальциемии. Состояние гипокальциемии наблюдается при гипопаратиреозе. Нарушение функции паращитовидных желе приводит к резкому снижению содержания ионизированного кальция в крови, что может сопровождаться судорожными приступами (тетания). Понижение концентрации кальция в плазме отмечают также при рахите, спру, обтурационной желтухе, нефрозах и гломерулонефритах.

Механизм свертывания крови.

Система свертывания крови представляет собой каскадную цепь протеолитических реакций.

Каскадность реакций обеспечивает постепенное усиление первоначального слабого сигнала – воздействия, вызывающего активацию внутреннего и внешнего пусковых механизмов свертывания. Каждая последующая стадия приводит к образованию все больших количеств активной формы очередного фактора. Происходит лавинообразное нарастание «мощности» каждой следующей ступени каскада, в результате стадия превращения фибриногена в фибрин протекает очень быстро.



Первая стадия – сокращение поврежденного сосуда.

Вторая стадия – образование белого тромба. Протромбин (VII фактор) под действием тромбопластина (III) тромбоцитов и ионов кальция (IV) превращается в активную форму – тромбин. В этой стадии участвуют факторы внешнего пускового механизма свертывания: проконвертин (VII); проакцелерин (V); фактор Стюарта (Х), а также факторы внутреннего пускового механизма свертывания: фактор Кристмаса (IХ); фактор Розенталя (ХI); фактор Хагемана (ХII)

Третья стадия – образование красного тромба. Тромбин активирует фибриноген (I), превращая его в активную форму фибрин – мономер. Затем образуется фибрин – полимер (фибриновый гель), который не отличается прочностью. Его легко может разрушить механическое воздействие. Под действием фермента трансглутаминазы (ХIIIa) образуются прочные ковалентные связи между мономерами фибрина, а также между фибрином и белком фибронектином, стабилизируя гель фибрина.

Через час тромб сжимается (ретракция тромба). Затем происходит фибринолиз (четвертая стадия). Плазминоген под действием фермента урокиназы и тканевого активатора плазминогена (ТАП) превращается в активную форму – плазмин (частичный протеолиз), который расщепляет в фибрине – полимере пептидные связи.

Тромб в течение нескольких дней рассасывается.



Роль витамина К в свертывании крови.

Витамин К входит в состав ферментов, катализирующих карбоксилирование глутаминовой кислоты с образованием γ-карбоксиглутаминовой кислоты, входящей в состав факторов свертывания крови: II, VII, IХ, Х.

Ингибиторы факторов свертывания крови:

белок плазмы антитромбин III, инактивирующий большинство факторов свертывания крови;

другие белки – ингибиторы протеиназ (α- макроглобулин, антиконвертин, тромбомодулин).



гепарин, активирующий антитромбин III;

антивитамины К – дикумарин, неодикумарин и др.

Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина.

Источник: http://studfiles.net/preview//page:3/

Белковые фракции методом электрофореза (в крови)

Электрофорез белков – метод разделения белков сыворотки крови на фракции под воздействием электрического тока. Метод дает общую оценку соотношения белков в норме и при патологии. Чаще представляет собой дополнительный тест в диагностике заболеваний. Основные показания к назначению: различные воспалительные заболевания, системные заболевания, заболевания печени, опухолевый процесс (миеломная болезнь).



При миеломной болезни и других гаммапатиях в крови и моче возможно появление парапротеинов (патологических иммуноглобулинов и их цепей). Для их обнаружения используют метод электрофореза с иммунофиксацией с использованием специальных антисывороток (см.»Иммуноэлектрофорез», «Определение свободных легких цепей иммуноглобулинов (каппа и лямбда) в сыворотке крови и моче»).

  • Аллопуринол. Аспаргиназа. Азатиоприн. Хлорпропамид. Цисплатин. Дапсон. Декстран. Эстрогены. Ибупрофен. Изониазид. Нитрофурантоин. Пероральные контрацептивы. Фенитоин. Преднизолон (высокие дозы). Сарграмостим. Вальпроевая кислота.
  • Эстрогены. Оральные контрацептивы. Фенитоин.
  • Эстрогены. Оральные контрацептивы.
  • Назначается в следующих случаях.

  • При острых и хронических воспалительных заболеваниях (инфекции, коллагенозы и многие другие). При онкологических заболеваниях. Нарушениях питания и синдроме мальабсорбции.

    Истинной гиперальбуминемия, обусловленной естественным причинами, не существуют. Любая ситуация, приводящая к снижению содержания воды в плазме, повышает концентрацию всех белков плазмы, включая альбумин.

  • Ревматические болезни. Термические ожоги. Грануломатозные процессы. Большинство бактериальных инфекций. Вирусные инфекции. Сопровожающиеся разрушением ткани. Некроз ткани ( в частности, наблюдающийся при злокачественных процессах). Васкулиты. Язвенные поражения кишечника. Серозиты. Подострый бактериальный эндокардит. Некоторые паразитарные поражения.
  • Острые и хронические заболевания печени. Амилоидоз. Нарушения питания. Злокачественные новообразования. Застойная сердечная недостаточность. Констриктивный перикардит. Поражения клапанов сердца. В некоторых редких случаях синтез альбумина практически отсутствует в результате генетических механизмов, то есть врожденной анальбуминемии. Величины альбумина при беременности обычно снижены совместно с повышением объёма плазмы.
  • Нефротический синдром. Термические ожоги. Травмы и раздавливание тканей. Транссудация или экссудация из полых органов или эпителиальных поверхностей. После кровотечений и введения кровозамещающих жидкостей. Желудочно-кишечные и лимфатические фистулы. Повторные торакоцентезы или парацентезы, различные энтеропатии, связанные с повышенной чувствительностью к пищевым продуктам (например, глютену).
  • Повышенная температура тела. Антиметаболиты. Семейная идиопатическая гипопротеинемия. Состояния гиперметаболизма гормонального происхождения (например, болезнь Кушинга, тиреотоксикоз, некоторые злокачественные новообразования, преэклампсия).
  • Беременность. Введение экзогенных эстрогенов. Различные моноклональные иммунопатии (в том числе миелома и макроглобулинемия Вальденстрема). Застойная сердечная недостаточность.
  • Белок острой фазы (фракция а1-глобулин содержит в основном альфа1-антитрипсин, кислы1 альфа1-гликопротеин, альфа1-липопротеин). Повышение при многочисленных острых, подострых, или хронических воспалительных и неопластических заболеваниях, а также при заболеваниях печени.
  • Тяжелые заболевания печени. Наследственный дефицит а1 — антитрипсина. Болезнь Tangiera (а1 — липопротеин)-отсутствием в плазме ЛПВП и апоА-I , повышением уровня ТГ и ранним развитием атеросклероза.
  • Альфа2-фракция — содержит в основном альфа2-макроглобулин, гаптоглобин, аполипопротеин В.
    Нефротический синдром (связанный с гипоальбуминемией); при некоторых подострых и хронических воспалительных и неопластических заболеваниях, стадия восстановления после термических ожогов.
  • В редких случаях при сахарном диабете. Панкреатит. Гемолиз.
  • Первичные или вторичные гиперлипопротеинемии (особенно типа II), моноклональные гаммапатии.

    Гипобеталипопротеинемии, дефицит IgA.

  • Поликлональные гаммапатии: Хронические заболевания печени, хронические инфекции, некоторые аутоиммунные (РА, СКВ). Поликлональные гаммапатии (перекрытие бета- и гамма- зон): Связанные с гепатитом, циррозом. Поликлональные гаммапатии (олигоклональные, на элетрофореграмме след в виде узкой полосы): Хронический активный (люпоидный) гепатит, циркулирующие иммунные комплексы (например, при ревматоидном артрите). Моноклональные гаммапатии: Заболевания, протекающие с дискразией или лимфопролиферацией клеток лимфоидной ткани (например, миелома, макроглобулинемия, амилоидоз, лимфома, хроническая лимфоцитарная лейкемия), моноклональная гаммапатия неустановленной этиологии.
  • Иммунодефицит или иммуносупрессия.

    Электрофорез белков – метод разделения белков сыворотки крови на фракции под воздействием электрического тока. Метод дает общую оценку соотношения белков в норме и при патологии. Чаще представляет собой дополнительный тест в диагностике заболеваний. Основные показания к назначению: различные воспалительные заболевания, системные заболевания, заболевания печени, опухолевый процесс (миеломная болезнь).

    При миеломной болезни и других гаммапатиях в крови и моче возможно появление парапротеинов (патологических иммуноглобулинов и их цепей). Для их обнаружения используют метод электрофореза с иммунофиксацией с использованием специальных антисывороток (см.»Иммуноэлектрофорез», «Определение свободных легких цепей иммуноглобулинов (каппа и лямбда) в сыворотке крови и моче»).

    Альбумин/глобулиновый коэффициент — отношение количества альбуминов к глобулинам в сыворотке крови. В норме составляет 1,5—2,3.

    Источник: http://amkdoc.ru/stati/6/476/

    Электрофорез белковых фракций

    Что такое клинический электрофорез (электрофорез белковых фракций)?

    Как известно, белки являются строительным материалом для наших клеток и тканей. Белки сыворотки крови человека состоят из более чем сотни разных белков. И каждый белок ответственнен за выполнение определенной функции в организме. Показатель «общий белок крови» включает в себя глобулины и альбумины. Альбумины являются самыми крупными молекулами белка. Глобулины же подразделяются на несколько видов (альфа 1, алфа 2 — глобулин,бета-глобулин, гамма-глобулины). Электрофорез позволяет разделить белки крови на фракции в зависимости от размера и величины заряда. Увеличение или уменьшение в размерах или количестве фракций белков служит сигналом для дальнейших исследований и последующей постановке диагноза.

    Электрофорез белка позволяет выявить любые изменения в молекулах белка, которые могут быть признаком патологических состояний.

    Показания для назначения клинического электрофореза (электрофореза белковых фракций)

    Данный метод используется как скрининговый для диагностики:

    острых и хронических воспалительных заболеваний,

    состояний дефицита белка,

    Диагностика и скрининг злокачественных гаммапатий с помощью электрофореза белков. Выявление моноклонального белка

    Моноклональные гаммапатии составляют группу болезней, характеризующихся быстрым увеличением отдельного клона плазматических клеток или В-лимфоцитов в костном мозге, продуцирующих гомогенный моноклональный белок (М-белок; моноклональный иммуноглобулин; парапротеин) Моноклональные гаммапатии могут сочетаться как со злокачественными, так и с доброкачественными состояниями. Ряд специалистов классифицирует мноклональные гаммапатии неопределенного значения как предраковую стадию, при которой доля миеломных клеток составляет 10% от общего числе клеток костного мозга. Приблизительно у 20 % людей с выявленными моноклональными гаммапатиями в течениелет развивается миелома (рак костного мозга).

    Клинические проявления злокачественных гаммапатий очень разнообразы, и в ряде случаев неспецифические нарушения могут долгое время доминировать в картине заболевания, что становится причиной позднего обращения к гематологу и несвевременной диагностики. Пациенты зачастую годами безрезультатно лечатся у неврологов, нефрологов, травматологов.

    Симптомы злокачественных гаммапатий

    Злокачественные гаммапатии (и, в первую очередь, миелома) в качестве неспецифических проявлений наиболее часто имеют следующие :

    — Костные нарушения ( остеопороз, ломкость костей, воспалительные процессы и боли в костях);

    — Поражения нервной ткани;

    — Функциональные нарушения почек;

    — Анемия, утомляемость, общая слабость;

    — Снижение защитной функции иммунной системы, склонность к инфекциям, увеличение сроков выздоровления после перенесенных инфекций.

    Пациенты с указанными функциональными нарушениями должны обязательно подвергаться лабораторному скринингу на наличие моноклонального белка (М-компонента) .

    Электрофорез белков мочи. Диагностика заболеваний почек

    Электрофорез белков мочи позволяет выявить наличие протеинурии (повышения уровня белка в моче) или провести уточняющую диагностику патологий, выявленных при электрофорезе белков сыворотки. Увеличение содержания белка в моче может свидетельствовать о наличии патологических нарушений в почках. Электрофорез белков мочи позволяет не только выявить протеинурею, но и дает информацию, необходимую для определения локализации и характера повреждения почки.

    Метод капиллярного электрофореза

    Клинико-диагностическая лаборатория на базе больницы им. Семашко проводит исследования фракций белков сывооротки и мочи, а также скрининг на наличие моноклонального белка методом капиллярного электрофореза

    Капиллярный электрофорез сегодня обеспечивает :

    1. Полную автоматизацию исследования — от нанесения образца до получения количественных результатов;

    2. Максимальную разрешающую способность и высокую чувствительность, позволяющую выявить М-компонент в концентрации, не превышающей 0,27 мг./мл.;

    3. Минимальное время получения результата (15 минут), что является обязательным требованием к скрининговому тесту;

    4. Фактическое отсутствие вовлеченности лабораторного персонала в аналитический процесс.

    Исследования осуществляется на автоматической системе для капиллярного электрофореза Minicap (Sebia,Франция)

    Сдать анализ на белковые фракции сыворотки и мочи и выявить наличие моноклонального белка можно в медицинском центре «Станадарт здоровья». Позвоните по телефону

    Источник: http://semashko-lab.ru/articles/elektroforez-belkovyh-frakciy

    Белковые фракции в сыворотке

    Определение количественных и качественных изменений основных фракций белка крови, используемое для диагностики и контроля лечения острых и хронических воспалений инфекционного и неинфекционного генеза, а также онкологических (моноклональных гаммапатий) и некоторых других заболеваний.

    Serum Protein Electrophoresis (SPE, SPEP).

    Электрофорез на пластинках с агарозным гелем.

    Г/л (грамм на литр), % (процент).

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    1. Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
    2. Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение и не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

    Общая информация об исследовании

    Общий белок сыворотки крови включает в себя альбумин и глобулины, которые в норме находятся в определенном качественном и количественном соотношении. Оно может быть оценено с помощью нескольких лабораторных методов. Электрофорез белков в агарозном геле – это метод разделения белковых молекул, основанный на различной скорости их движения в электрическом поле в зависимости от размера, заряда и формы. При разделении общего белка сыворотки крови удается выявить 5 основных фракций. При проведении электрофореза белковые фракции определяются в виде полос различной ширины с характерным, специфичным для каждого типа белка местоположением в геле. Для определения доли каждой фракции в общем количестве белка оценивают интенсивность полос. Так, например, основная белковая фракция сыворотки – это альбумин. На его долю приходится около 2/3 всего белка крови. Альбумин соответствует самой интенсивной полосе, полученной при электрофорезе белков сыворотки крови здорового человека. К другим фракциям сыворотки, выявляемым с помощью метода электрофореза, относят: альфа-1 (преимущественно альфа-1-антитрипсин), альфа-2 (альфа-2-макроглобулин и гаптоглобин), бета (трансферрин и С3-компонент комплемента) и гамма-глобулины (иммуноглобулины). Различные острые и хронические воспалительные процессы и опухолевые заболевания сопровождаются изменением нормального соотношения белковых фракций. Отсутствие какой-либо полосы может указывать на дефицит белка, что наблюдается при иммунодефицитах или недостаточности альфа-1-антитрипсина. Избыток какого-либо белка сопровождается увеличением интенсивности соответствующей полосы, что наиболее часто наблюдается при различных гаммапатиях. Результат электрофоретического разделения белков может быть представлен графически, при этом каждая фракция характеризуется определенной высотой, отражающей ее долю в общем белке сыворотки. Патологическое увеличение доли какой-либо фракции носит название «пик», например «М-пик» при множественной миеломе.

    Исследование белковых фракций играет особую роль при диагностике моноклональных гаммапатий. В эту группу заболеваний входят множественная миелома, моноклональная гаммапатия неясного генеза, макроглобулинемия Вальденстрема и некоторые другие состояния. Эти заболевания характеризуются клональной пролиферацией В-лимфоцитов или плазматических клеток, при которой происходит бесконтрольная выработка одного вида (одного идиотипа) иммуноглобулинов. При разделении сывороточного белка пациентов с моноклональной гаммапатией с помощью электрофореза наблюдаются характерные изменения – появление узкой интенсивной полосы в зоне гамма-глобулинов, которая называется М-пик, или М-белок. М-пик может отражать гиперпродукцию любого иммуноглобулина (как IgG при множественной миеломе, так и IgM при макроглобулинемии Вальденстрема и IgA при моноклональной гаммапатии неясного генеза). Важно отметить, что метод электрофореза в агарозном геле не позволяет дифференцировать различные классы иммуноглобулинов между собой. Для этой цели используют иммуноэлектрофорез. Кроме того, данное исследование позволяет дать приблизительную оценку количества патологического иммуноглобулина. В связи с этим исследование не показано для дифференциальной диагностики множественной миеломы и моноклональной гаммапатии неясного генеза, так как она требует более точного измерения количества М-белка. С другой стороны, если диагноз «множественная миелома» был верифицирован, метод электрофореза в агарозном геле может быть использован для оценки динамики М-белка при контроле лечения. Следует отметить, что у 10 % пациентов с множественной миеломой нет никаких отклонений в протеинограмме. Таким образом, нормальная протеинограмма, полученная с помощью электрофореза в агарозном геле, не позволяет полностью исключить это заболевание.

    Другим примером гаммапатии, выявляемой с помощью электрофореза, является ее поликлональная разновидность. Она характеризуется гиперпродукцией различных видов (различных идиотипов) иммуноглобулинов, что определяется как однородное увеличение интенсивности полосы гамма-глобулинов при отсутствии каких-либо пиков. Поликлональная гаммапатия наблюдается при многих хронических воспалительных заболеваниях (инфекционных и аутоиммунных), а также при патологии печени (вирусных гепатитах).

    Исследование белковых фракций сыворотки крови используют для диагностики различных синдромов иммунодефицита. Примером может послужить агаммаглобулинемия Брутона, при которой снижается концентрация всех классов иммуноглобулинов. Электрофорез белков сыворотки пациента с болезнью Брутона характеризуется отсутствием или крайне низкой интенсивностью полосы гамма-глобулинов. Низкая интенсивность альфа-1-полосы – характерный диагностический признак недостаточности альфа-1-антитрипсина.

    Широкий спектр состояний, при которых наблюдаются качественные и количественные изменения протеинограммы, включает самые разные заболевания (от хронической сердечной недостаточности до вирусных гепатитов). Несмотря на наличие некоторых типичных отклонений протеинограммы, позволяющих в ряде случаев с определенной уверенностью диагностировать заболевание, обычно результат электрофореза белков сыворотки не может служить однозначным критерием постановки диагноза. Поэтому интерпретацию исследования белковых фракций крови проводят с учетом дополнительных клинических, лабораторных и инструментальных данных.

    Для чего используется исследование?

    • Для оценки качественного и количественного соотношения основных белковых фракций у пациентов с острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, аутоиммунными состояниями и некоторыми болезнями печени (хронические вирусные гепатиты) и почек (нефротический синдром).
    • Для диагностики и контроля лечения моноклональных гаммапатий (множественной миеломы и моноклональной гаммапатии неясного генеза).
    • Для диагностики синдромов иммунодефицита (агаммаглобулинемии Брутона).

    Когда назначается исследование?

    • При обследовании пациента с острыми или хроническими инфекционными заболеваниями, аутоиммунными состояниями и некоторыми болезнями печени (хронические вирусные гепатиты) и почек (нефротический синдром).
    • При симптомах множественной миеломы: патологических переломах или болях в костях, немотивированной слабости, персистирующей лихорадки, рецидивирующих инфекционных заболеваниях.
    • При отклонениях в других лабораторных анализах, позволяющих заподозрить множественную миелому: гиперкальциемии, гипоальбуминемии, лейкопении и анемии.
    • При подозрении на недостаточность альфа-1-антитрипсина, болезнь Брутона и другие иммунодефициты.

    Источник: http://helix.ru/kb/item/475

    Электрофорез белков крови

    Электрофорез белков – вид анализа крови для оценки соотношения между различными белками крови и для выявления парапротеина.

    Синонимы: serum protein electrophoresis, protein ELP, SPE, SPEP.

    Электрофорез белков крови это —

    исследование количественых и качественных характеристик белков крови по их распределению в электрическом поле.

    Из белков построены все клетки тела. Белок — сложная молекула, состоит из более простых «кирпичиков» — аминокислот. Суммарно все белки крови называют «общий белок», в свою очередь он состоит из компонентов — альбуминов, глобулинов.

    Белки способны нести положительный или отрицательный заряд в зависимости от кислотности среды, в которой проводят электрофорез. Движение белков зависит от величины заряда, формы и размера молекулы, ее веса, свойств среды.

    Позитивно заряженные молекулы белков лучше адсорбируются, чем отрицательно заряженные, поэтому при электрофорезе белков применяют негативные заряды. Альбумин несет наибольший отрицательный заряд, поэтому быстрее двигается к аноду.

    Носители для электрофореза

    • хроматографическая бумага
    • ацетатцелюлозная бумага
    • агаровый гель
    • акриловый гель
    • полиакриловый гель
    • капиллярный электрофорез

    Электрофорезом белки крови разделяются на 5-6 фракций – альбумины, альфа-1-, альфа-2-, бета- и гамма-глобулины (иногда на бета-1 и бета-2-глобулины).

    Показания

    • диагностика моноклональных гаммапатий (множественной миеломы)!
    • повышенный общий белок крови
    • повышенный уровень гамма-глобулинов
    • очень высокого СОЭ – более 50 мм/час (когда нет других причин для его роста)
    • скрининг, диагностика и контроль лечения моноклональных гаммапатий (миеломной болезни)

    Единственное прямое показание для проведения электрофореза белков крови – выявление моноклональной гаммапатии. Сегодня врач может назначить анализ конкретного интересующего белка крови, а не электрофорез, который дает лишь ориентировочные результаты.

    Моноклональная гаммапатия

    Моноклональная гаммапатия — появление в крови однородного по свойствам клона иммуноглобулинов — парапротеинов, синтезированных одним клоном клеток

    При миеломной болезни в крови появляется значительное количество «неправильного» белка – парапротеина или М-белка. Это «моноклональный белок», поскольку синтезируется только в клетках из одного злокачественного клона В-лимфоцитов, он весь одинаков и его очень хорошо видно на кривой электрофореза белков. Количество парапротеина (затемнение, скачок вверх) указывает на наличие миеломы, позволяет оценить ее размеры, прогрессию, а изменения концентрации – ранний симптом обострения или ремиссии.

    Симптомы

    • боли в костях – особенно позвоночника и таза
    • сильная головная боль
    • изменения в общем анализе мочи — протеинутрия
    • выраженная общая слабость, усталость
    • частые инфекционные заболевания

    Норма

    Название фракции белка

    Абсолютные величины, г/л

    Помните, что у каждой лаборатории, а точнее у лабораторного оборудования и реактивов есть «свои» нормы. В бланке лабораторного исследования они идут в графе – референсные значения или норма.

    Дополнительные исследования

    • общий анализ крови
    • общий анализ мочи
    • печеночные пробы – билирубин, АСТ, АЛТ, ГГТ, щелочная фосфатаза
    • почечные пробы – креатинин, мочевина, мочевая кислота
    • общий белок крови, альбумин, глобулины
    • иммунофиксафия белков сыворотки крови
    • моноклональные иммуноглобулины
    • поликлональные иммуноглобулины
    • свободные легкие цепи в крови
    • бета-2-микроглобулин
    • альбумин в моче
    • электрофорез белков мочи
    • иммунофиксация белков мочи
    • свободные легкие цепи в моче

    Что влияет на результат?

    • повышенный уровень билирубина
    • гемолиз – разрушение эритроцитов крови

    Белковые фракции на электрофоретической кривой

    1. Преальбумин (транстиретин) — печеночный белок, расположен перед альбумином с коротким временем полувыведения, связывает гормоны щитовидной железы, транспортный белок для витамина А (предупреждает его потерю с мочой). Количество преальбумина позволяет оценить обеспеченность белками периферических тканей. Снижен при печеночных заболеваниях и дефиците питания.

    2. Альбумины — наиболее крупная фракция белков крови, хорошо виден пик. Причины снижения альбуминов подробно описаны в данной статье. Редко при врожденной мутации развивается дисальбуминемия – фракция альбумина раздваивается.

    3. Альфа-1-липопротеины — слабая однородно окрашенная область между альбумином и альфа-1-глобулином.

    4. Размеры зоны альфа-1-глобулина определяются уровнем альфа-1-антитрипсина, орозомукоида, альфа-1-фетопротеина, альфа-1-микроглобулина. При остром воспалении — видимое затемнение.

    • альфа-1-антитрипсин — генетическая вариабельность может проявиться изменением движения белков, циррозом печени, повышением печеночных проб, при беременности — снижение
    • альфа-1-фетопротеин — маркер опухолей печени и врожденной патологии в пренатальной диагностике
    • при снижении скорости гломерулярной фильтрации — повышение в крови альфа-1-микроглобулина

    5. Альфа-2-глобулины — на формировании данной зоны влияют альфа-2-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобин, пре-бета-липопротеин. Изменения не имеют клинического значения.

    6. Интерзона между альфа-2- и гамма-глобулинами — окрашивается слабо, при гемолизе возникают комплексы гемоглобин-гаптоглобин, формирующие в этой области видимую полоску.

    7. Бета-1-глобулины – размер затемнения определяется количеством трансферрина, фибриногена, С-реактивного белка, гемопексина. Интенсивность коррелирует с общей железосвязывающей способностью сыворотки крови. При железодефицитной анемии и при беременности повышается синтез трансферрина и усиливается контрастность зоны

    8. Интерзона между бета-1- и бета-2- глобулинами образована иммуноглобулином А (IgA). Типичную полоску формирует бета-липопротеин.

    9. Бета-2-глобулины — сформированы С4 компонентом комплемента, повышение — при остром воспалении, снижение — образование иммунокомплексов при аутоиммунных заболеваниях.

    Комплемент — 11 белков, факторы неспецифического гуморального иммунитета.

    • бета-2-микроглобулин — часть HLA системы на поверхности клеток, отображает скорость деления клеток, повышение в крови — снижение скорости фильтрации в почках, лимфопролиферативные заболевания
    • фибриноген — белок системы свертывания крови, расположен между бета- и гамма-глобулинами, повышен при остром воспалении, снижен при тяжелой печеночной недостаточности, диссеминированном внутрисосудистом свертывании

    10. Гамма-глобулины — характеристики зоны определяются свойствами классов иммуноглобулина G (IgG). Иммуноглобулин М (IgM) расположен ближе к старту.

    Моноклональные иммуноглобулины – выявляются только при наличии заболевания, продукт одного клона клеток из В-лимфоцитов. С возрастом выявление парапротеина растет, появляется доброкачественная гипериммуноглобулинемия без каких-либо симптомов.

    Источник: http://gradusnik.net/elektroforez-belkov-krovi/

    Белковые фракции методом электрофореза (в крови)

    Ключевые слова: геммапатия иммуноглобулин воспаление альбумин глобулин миеломная болезнь кровь

    Электрофорез белков – метод разделения белков сыворотки крови на фракции под воздействием электрического тока. Метод дает общую оценку соотношения белков в норме и при патологии. Чаще представляет собой дополнительный тест в диагностике заболеваний. Основные показания к назначению: различные воспалительные заболевания, системные заболевания, заболевания печени, опухолевый процесс (миеломная болезнь).

    При миеломной болезни и других гаммапатиях в крови и моче возможно появление парапротеинов (патологических иммуноглобулинов и их цепей). Для их обнаружения используют метод электрофореза с иммунофиксацией с использованием специальных антисывороток (см.»Иммуноэлектрофорез», «Определение свободных легких цепей иммуноглобулинов (каппа и лямбда) в сыворотке крови и моче»).

    Альбумин/глобулиновый коэффициент — отношение количества альбуминов к глобулинам в сыворотке крови. В норме составляет 1,5—2,3.

    Источник: http://old.smed.ru/guides/371

    Электрофорез белков

    Для разделения белков сыворотки крови на их составляющие используют метод электрофореза, основанный на различной подвижности белков сыворотки крови в электрическом поле.

    Принцип разделения белков сыворотки крови на фракции состоит в том, что в электрическом поле белки сыворотки крови движутся по смоченной буферным раствором хроматографической бумаге (ацетатцеллюлозной пленке, крахмаловому, агаровом гелям) со скоростью, зависящей в основном от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц.

    Вследствие этого белки сыворотки крови разделяются обычно на пять основных фракций: альбумины, альфа-1-глобулины, альфа-2-глобулины, бета-глобулины, гамма-глобулины, содержание которых определяется с помощью фотометрии или денситометрии.

    Электрофорез в агаровом, крахмальном и особенно полиакриламидном геле дает лучшие результаты: четкое разделение и большое количество белковых фракций сыворотки. Недостатки метода: сложность процедуры приготовления геля (дороговизна готовых гелевых пластин).

    Преимущества электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке:

    1. Химическая однородность пленки и одинаковый размер пор

    2. Требует малый объем пробы (0,2-2 мкл) для разделения

    3. Быстрота разделения и окраски белков, легкость отмывания фона

    4. Низкая стоимость

    В сыворотке крови здорового человека при электрофорезе можно обнаружить шесть белковых фракций: преальбумины, альбумины, альфа-1-глобулины, альфа-2-глобулины, бета-глобулины и гамма-глобулины.

    Это исследование в диагностическом отношении более информативно чем определение только общего белка или альбумина. При многих заболеваниях изменяется процентное соотношение белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы.

    Анализ фореграммы белков позволяет установить, за счет какой фракции происходит увеличение или дефицит белка, а также судить о специфичности изменений, характерных для данной патологии. Исследование белковых фракций, позволяет судить о характерном для какого-либо заболевания избытке или дефиците белка только в самой общей форме.

    Источник: http://studopedia.ru/8_86361_elektroforez-belkov.html